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第一部分钙蛋白酶小亚基-1(Capn4)在上皮性卵巢癌组织及细胞系中的表达目的:验证Capn4在上皮性卵巢癌(EOC)组织和细胞系中的表达情况,分析其与临床病理的相关性,为深入研究Capn4在EOC中的作用及机制奠定基础。方法:应用免疫组织化学方法检测上皮性卵巢癌组织中Capn4蛋白的表达情况;应用Western blot检测Capn4在人上皮性卵巢癌细胞系Hey,Skov3,HO8910,HO8910-PM及人永生化卵巢上皮细胞系Moody中的表达。结果:(1)Capn4在上皮性卵巢癌组织中的表达显著高于卵巢交界性肿瘤和正常卵巢上皮。(2)Capn4表达与患者的FIGO分期及淋巴结转移呈正相关(p<0.01),且与患者预后密切相关,Capn4高表达的患者的总生存期要低于Capn4低表达的患者。(3)Capn4在所检测的4种上皮性卵巢癌细胞系Hey、Skov3、HO8910、HO8910-PM中均有表达,且其表达量均高于人永生化卵巢上皮细胞系Moody。结论:Capn4在上皮性卵巢癌组织和细胞系中高表达,并与上皮性卵巢癌进展相关。第二部分Capn4促进上皮性卵巢癌细胞的增殖及转移目的:体外验证Capn4对卵巢癌细胞增殖、周期及转移能力的影响,揭示Capn4在上皮性卵巢癌发生发展中的作用。方法:应用Capn4特异性siRNA下调Hey卵巢癌细胞中Capn4的表达,应用Capn4过表达质粒上调HO8910卵巢癌细胞中Capn4的表达,采用划痕实验,Transwell细胞迁移实验观察Capn4干预前后细胞迁移能力的改变;采用CCK-8法观察Capn4表达的改变对细胞增殖能力的影响;采用流式细胞分析Capn4对细胞周期的影响。结果:(1)上调Capn4的表达可显著增加卵巢癌细胞的体外增殖能力。(2)上调Capn4的表达可增加处于S期细胞的比例。(3)上调Capn4可增强卵巢癌细胞的迁移能力。结论:Capn4表达的升高可提高卵巢癌细胞的增殖和迁移能力。第三部分Capn4与OPN在上皮性卵巢癌组织和细胞系中的表达呈正相关目的:探究上皮性卵巢癌中Capn4和OPN表达的相关性,为探究Capn4调控上皮性卵巢癌转移的分子机制奠定基础。方法:首先通过对上皮性卵巢癌组织的连续切片进行免疫组织化学染色,观察上皮性卵巢癌组织中Capn4和OPN表达的相关性;然后选取了一对高度同源但转移能力不同的卵巢癌细胞系HO8910和HO8910-PM作为研究对象,应用Transwell实验验证两细胞转移能力的差异,并采用Western blot及细胞免疫荧光检测两细胞系中Capn4和OPN的表达和分布差异。为进一步验证Capn4与OPN的上下游关系,我们应用低表达Capn4的卵巢癌细胞株HO8910进行了Capn4过表达质粒和OPN特异性si-RNA的共转染,采用Western blot和Transwell实验观察Capn4、OPN的表达情况及细胞的转移能力变化。结果:(1)Capn4和OPN在上皮性卵巢癌组织中的表达呈正相关。(2)卵巢癌细胞系中Capn4和OPN的表达具有相关性且与细胞的转移能力相关。(3)过表达Capn4可促进OPN的表达并可增强HO8910细胞的转移能力,而在过表达Capn4的同时敲减OPN可一定程度逆转Capn4过表达引起的细胞转移能力的增强。结论:Capn4和OPN在上皮性卵巢癌组织及细胞系中的表达呈正相关,且Capn4可能通过调节OPN的表达促进上皮性卵巢癌细胞的转移。第四部分卵巢癌细胞中Capn4促进OPN表达的分子机制研究目的:探究上皮性卵巢癌中Capn4通过OPN调控卵巢癌细胞转移的具体分子机制。方法:通过在卵巢癌细胞中敲减和过表达Capn4,采用Western blot验证Wnt/βcatenin信号通路的核心分子b-catenin与Capn4及OPN表达的关系;在卵巢癌细胞中敲减b-catenin,Western blot验证OPN的表达;在HO8910细胞中过表达Capn4的同时敲减b-catenin,Western blot验证OPN的表达;应用Wnt/βcatenin信号通路的阻滞剂XAV939和激动剂LiCl深入探究Capn4、OPN与Wnt/βcatenin信号通路的关系。结果:(1)上皮性卵巢癌细胞中Capn4通过Wnt/βcatenin信号通路促进OPN的表达。结论:在上皮性卵巢癌细胞中,Capn4是通过Wnt/βcatenin信号通路促进OPN的表达的。