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急性肺损伤(acute lung injury ,ALI)是指由于各种原因所致的肺组织结构发生特征性病理改变而出现的临床综合征。临床上以急性进行性加重的呼吸困难、呼吸窘迫、难治性低氧血症和非心源性水肿为早期表现,最终发展为严重呼吸衰竭,称为急性呼吸窘迫综合征(ARDS)或多脏器功能衰竭(multisystem organsfailure,MOF)。ALI的发病率和死亡率很高,在美国每年大约有 10 万人发生ARDS,根据大多数文献报道,病死率高达 50%-70%,多器官衰竭(MOF)是ARDS病死率居高不下的主要原因。研究发现,蛋白酶活性增高、抗蛋白酶活性降低在急性肺损伤的发病机制中起重要的作用。因此,研究急性肺损伤的发病机制,并在此基础上发展新的治疗方案具有十分重要的意义。 气管内注入内毒素引起大鼠肺脏病理生理变化和 ALI 与临床上 ARDS 的发生发展相似,内毒素引起中性粒细胞浸润大鼠肺组织、产生氧自由基和蛋白水解酶活性增高等,这些因素作用于肺毛细血管基膜,使之通透性增加,导致肺组织水肿和气体交换能力下降。因此,抑制肺蛋白水解酶活性增高,有可能成为防治急性肺损伤的一个焦点。近年来,大豆作为功能性食品尤为引人注目,大豆中的低聚糖、大豆异黄酮、大豆皂苷、大豆磷脂、大豆多肽、大豆蛋白等化学物质具有显著的生理活性。研究表明大豆蛋白酶抑制剂(SBTI)具有抗炎作用,它对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶及弹性蛋白酶三种相关的蛋白酶发生特异抑制作用。目前它主要用于抗癌及治疗艾滋病,但是否对肺脏也有保护作用,尚未见报道。在理论上我们认为其在防治急性肺损伤等重症方面可能有一定的地位和前景,需要进一步深入研究。 目的:本实验旨在从大豆中提取分离大豆蛋白酶抑制剂,然后运用大豆蛋白酶抑制剂防治内毒素致大鼠急性肺损伤模型,观察大豆蛋白酶抑制剂对内毒素致大鼠急性肺损伤的作用,并初步探讨其作用机制,为中西医结合防治急性肺损伤提供理论基础和动物实验资料。 方法:本实验分为二部分,第一部分:建立从大豆中提取分离大豆蛋白酶抑制剂的方法及其抑制活性的测定,主要运用膜分离法和盐析法。第二部分:大豆蛋白酶抑制剂防治内毒素致大鼠急性肺损伤的实验研究。健康 SD 大鼠 120 只,随机分为正常组、假手术组、模型组、PMSF组、SBTI大剂量组、SBTI中剂量组6组,每组20只。实验组除正常组和假手术外,其他各组均为气管内注入内毒素剂量为6.0mg/kg溶于0.3mlNS,假手术组气管内注入等量的生理盐水。其中 PMSF 组为阳性对照组。各治疗组于造模的前 1天给予治疗药物。其中中剂量组、大剂量组大鼠分别按体重腹腔注射给予 SBTI50mg/kg,