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目的 子宫肌瘤是女性生殖器官中最常见的良性肿瘤,在30岁以上育龄妇女中其发生率达20%~25%,是导致子宫切除术的主要原因之一。子宫肌瘤的确切病因尚不清楚,但可以肯定的是子宫肌瘤的发生、生长与女性激素刺激有关,与子宫平滑肌细胞异常增殖有关。近年来有文献报道:子宫肌瘤的发生是多因素,多环节的,同一子宫上的多发性肌瘤起源并不相同,并非由单一的染色体突变的细胞引起,可能是子宫肌细胞在女性激素刺激下,通过生长因子的介导导致局部微环境变化而产生的。女性激素促细胞的增殖、分化作用是由局部来源的多肽类生长因子通过自分泌、旁分泌形式介导的,这些生长因子可能是通过改变子宫肌细胞遗传物质中细胞癌基因和肿瘤抑制基因的活性而促发的,其中胰岛素样生长因子(Insulin-like growth facturs, IGFs)对子宫肌细胞及其间质细胞有很强的致有丝分裂作用。并有学者发现子宫肌瘤组织中IGF-Ⅰ结合位点增加。本研究应用半定量RT-PCR方法检测子宫肌瘤组织与正常子宫肌组织中IGF-ⅠmRNA、IGF—ⅡmRNA表达水平和这种表达与月经周期的关系,旨在探讨IGF-Ⅰ,IGF-Ⅱ与子宫肌瘤发生、发展的关系,以期进一步阐述子宫肌瘤的生长机制。 实验材料与方法 1.标本与来源:采集因子宫肌瘤行子宫切除术的30例病例,术前3个月未用激素治疗。标本均经术后病理确诊,子宫内膜分期按术后内膜病理检查确定:增殖期16例,分泌期10例,萎缩型1例,简单型或复杂型增生过长3例。收集子宫肌瘤中心部位组织30例,及其包膜 Zcm外正常子宫肌组织 18例作为对照组,所有标本取材后置EPPendorf管中,贮存在一70℃超低温冰箱待测。 2.实验材料:TRIZol、逆转录试剂盒:大连宝生物(TakaRa公司产品)提供。 引物:北京奥科生物技术有限公司合成。 3.实验器材:PCR扩增仪:w’n刁—(美国) 低温台式离心机:JC-480型(德国) 凝胶成像自动分析系统:ID KODAK(日本) Dn一 Ill31A 型电泳槽门c京) 方法:半定量逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR法) 1.采用异硫氰酸脱一酚一氯仿方法提取组织总RNA 2.RT-CDNA:逆转录合成 CDNA 3.PCR扩增 4.山NA电泳、自动成像分析、检测各扩增带的产物含量 5.观察结果、统计处理 结 果 1.IGFJ在子宫肌瘤组织、正常子宫肌组织中的相对含量分别为:93.93。17.50,68.14【5.00,肌瘤组织的表达明显高于正常子宫肌组织,差异非常显著u叩.皿厂。而子宫肌瘤组织、正常子宫肌组织中区T一H的表达经比较差异无显著性p>o.05入其相对含量分别为71.61。2.29,70.53。2.78。 2.子宫肌瘤组织IGFJ相对含量在增殖期和分泌期分别是106.67。3.55,72.88 S 3.88,增殖期明显高于分泌期,差异非常显著瞩叩.皿1人而1切一D相对含量在增殖期、分泌期无显著差异(P>o.05),分别为71.67土2.33,7二.* 士2.45。 ·2· 3.肌瘤组织不论在增殖期或分泌期,其IGF-I的相对含量均高于正常子宫肌组织,而IGF-11的相对含量差异无显著性。 讨 论 胰岛素样生长因子*GF)是由两种相关多肽组成,胰岛素样生长因子一I仁GF一互)和胰岛素样生长因子一11 (IG-11LIGFJ是一种多功能细胞增殖调控因子,与细胞内信号转导有关,可导致细胞的增殖、分化,已证实其具有促进平滑肌细胞及其间质细胞有丝分裂的作用,而IGF-11主要调节物质的加工及降解,与细胞内的信号转导无关。它们与各自受体结合后发挥各自的生物学效应。1990年 Rein等人首先在体外培养的子宫肌细胞和肌瘤细胞的间质中发现 IGF司和 IGF-11存在。1992年 Chan-drasekhary在研究中发现:在子宫肌瘤细胞表面含有特异的,高亲和力的比FJ结合位点,且比F-I结合位点增加,而无兀F-11的增加。本实验采用半定量RT-PCR方法检测子宫肌瘤组织与正常子宫肌组织中出F-ImmA,IGF-D m皿AR的表达水平,结果表明:子宫肌瘤组织、正常子宫肌组织中均有IGF-I,IGF-11基因表达,IGF-I基因在肌瘤组织的表达水平显著高于正常子宫肌组织,而 IGF—11基因在肌瘤组织和正常子宫肌组织中表达水平无统计学意义。可以认为:IGF-I对子宫肌瘤的生长、发育起主要作用。 可以肯定的是子宫肌瘤的发生、发展与女性激素有关,近年来有文献报道:雌孕激素在子宫肌瘤发生、发展中促细胞增殖、分化作用是通过一些生长因子介导的。本研究补充了文献资料发现,肌瘤组织中IGF一二mRNA表达水平在增殖期明显高于分泌期,说明IGF-I的介导作用与月经周期变化有关,而无论增殖期、分泌期肌瘤,其IGF-IrnRNA表达均高于正常子宫肌组织,而IGF ·3·一11 InRNA表达水平在增殖期和分泌期无显著性差异,且无论增殖期\分泌期肌瘤,其 IGF?