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目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)对人结肠癌SW480细胞LIMK1表达和迁移与侵袭的作用以及沉默LIMK1的影响,观察DADS与LIMK1对uPA/uPAR表达的影响,探讨DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭的分子机制。方法:MTT检测DADS对SW480细胞增殖的影响;RNA干扰技术建立稳定LIMK1-miRNA/SW480细胞株;RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学、划痕实验和侵袭实验分别检测DADS与RNA干扰对SW480细胞LIMK1、uPA/uPAR、迁移与侵袭及Rac1-LIMK1通路信号分子的影响。结果:1. DADS可抑制人结肠癌SW480细胞增殖、迁移与侵袭MTT结果显示,DADS呈时间-剂量依赖性抑制SW480细胞增殖(P<0.05)。迁移实验显示,48h后,DADS组呈浓度依赖性抑制细胞迁移率(P<0.05)。侵袭实验显示,DADS处理后穿膜细胞较对照组呈浓度依赖性显著减少(P<0.05)。表明DADS可呈浓度依赖性抑制SW480细胞迁移与侵袭。2. DADS下调SW480细胞LIMK1表达RT-PCR结果显示,DADS呈时间依赖性抑制LIMK1 mRNA(P<0.01)。免疫细胞化学发现,未处理组LIMK1表达呈强阳性,DADS处理不同时间后,LIMK1表达明显降低(P<0.05)。Western blot显示,与对照组相比,DADS可呈剂量—时间依赖性下调LIMK1表达(P<0.05)。3.沉默LIMK1对DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭的影响免疫荧光、Western blot、免疫细胞化学检测证明成功构建稳定沉默LIMK1基因的LIMK1-miR/SW480细胞株。Western blot显示,DADS组、干扰组较对照组和空载体组的LIMK1及p-LIMK1均明显下调,LIMK1沉默组在DADS处理前后,LIMK1表达无显著变化。表明DADS可抑制LIMK1表达及磷酸化。迁移实验显示,48h后,干扰组和DADS处理组细胞迁移率较对照组和空载体组明显降低(P<0.05),空载体组与对照组无明显变化(P>0.05)。表明LIMK1与SW480细胞迁移能力正相关;DADS通过下调LIMK1及磷酸化抑制SW480细胞迁移。干扰组加药后细胞迁移抑制最明显,表明DADS还可能通过其他途径抑制细胞迁移。侵袭实验显示,干扰组和DADS组穿膜细胞较未处理组和空载体组显著减少(P<0.05);空载体组较对照组无显著改变(P>0.05),表明LIMK1与SW480细胞侵袭能力呈正相关,DADS通过下调LIMK1及磷酸化抑制SW480细胞侵袭。干扰组加药后细胞侵袭抑制更明显,表明DADS还通过其他机制抑制细胞侵袭。4. DADS对Rac1-LIMK1信号通路的影响RT-PCR与Western blot结果显示,DADS呈时间依赖性抑制Rac1、Rock1、PAK1、LIMK1、Destrin mRNA和蛋白表达(P<0.05)。cofilin1 mRNA和蛋白表达无显著差异(P>0.05),呈时间依赖性抑制p-LIMK1、p-cofilin1表达(P<0.05)。5. DADS与沉默LIMK1对uPA/uPAR蛋白表达的影响Western blot结果显示,DADS处理组与LIMK1干扰组的uPA、uPAR表达显著下调,DADS处理干扰组后uPA/uPAR表达下调更明显(P<0.05)。表明DADS可抑制uPA/uPAR表达,沉默LIMK1可负调控调控uPA/uPAR表达, DADS可直接或通过下调LIMK1下调uPA/uPAR表达。结论:1. DADS通过负调控Rac1-LIMK1信号通路,引起LIMK1表达抑制及磷酸化受阻抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭。2.成功构建LIMK1-miR/SW480重组细胞系。3.沉默LIMK1可抑制SW480细胞迁移与侵袭。4. DADS与LIMK1可调控uPA/uPAR表达。5. DADS可直接或通过LIMK1间接下调uPA/uPAR抑制SW480细胞迁移与侵袭。