石榴优异资源的调查、收集和RAPD鉴定方法的研究

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本文从石榴资源调查、优良石榴资源的引种、石榴基因组DNA的提取方法、石榴RAPD反应条件的优化及应用RAPD标记进行资源鉴定等方面进行了研究。 1.对全国主产区的部分石榴资源进行了调查,掌握了各产区主栽品种的生物学特性,初步了解了我国石榴生产的现状。 对32个表现较好的石榴资源进行了引种,并建立了40020 m2石榴资源圃。资源圃中包括①软子资源有4个(峄城软子、突尼斯软子、河阴软子、青皮软子);②半软子资源4个(1临选1号、临选14号、河阴石榴、泰山红):③酸石榴资源2个(大红酸、红皮酸);④观赏石榴资源2个(单瓣花石榴、矮石榴);⑤绿子石榴资源2个(大绿子、甜绿子);⑥蓝子石榴资源1个(蓝宝石);⑦抗裂果资源3个(大子石榴、河阴1号、大红酸);⑧重瓣花石榴资源3个(粉红花石榴、牡丹花石榴、重瓣花石榴)。 对种质资源的引种生态适应性进行了初步的调查。在2005年较长低温的环境条件下,原产北方的品种表现长势良好,四川品种青皮软子、大绿子无冻害现象,但生长势较弱,叶片发黄,其适应能力需要进一步的观察,云南石榴品种甜绿子受到冻害,地上部干枯。 2.对河南省石榴品种资源进行了的调查,初步把河南省石榴产区划分为8个栽培区.。通过对原产河南省河阴石榴资源的调查,发现1个河阴石榴的芽变类型—河阴1号,其高产优质,初步认定为河阴石榴优良的晚熟芽变。 石榴品种资源调查表明:在郑州及周边地区引入的天红蛋品种易感染根腐病;净皮甜在成熟后期表现出严重的裂果现象,同时容易感染干腐病,严重时造成全株干枯死亡,不宜在郑州地区大面积推广;公斤石榴、泰山红、突尼斯软子、河阴1号、农大1号早实性、高产稳产、质优、耐贮性等综合性状表现良好,为河南省适宜发展的石榴品种。 3.初步开展了石榴种质资源无性繁殖和茎尖离体保存研究。试验结果表明,石榴扦插苗新梢茎尖培养,以MS+6-BA 2.0mg/L+IBA 0.1mg/L培养基为最佳继代培养基配方。 4.对石榴叶片DNA的提取方法进行了研究。和大田叶片相比,扦插枝条叶片DNA的提取效果较好;SDS法和CTAB法相比,SDS法尽管得率较高,达600~800 u g·g-1,但OD值低,为1.40~1.60,无法进行下游的操作。而改良CTAB Ⅰ法,其得率为500~600u g·g-1,OD值为1.80~1.90,是理想的提取石榴叶片DNA的方法。 5.CTAB Ⅰ法提取DNA能扩增出清晰的多态性带,石榴RAPD扩增的最佳反应体系为:10×reaction buffer:5μl;dNTP(各2.5mM):4μl;引物(10nM):2μl;Taq酶:0.4μl(2∪):DNA模板:3μl(50ng);ddH2O:35.6μl;反应终体积50μl。 反应条件为:94℃、4min,94℃、1min,37℃、1min,72℃、2min,共45个循环;72℃延伸7min,4℃保存。 6.用5个形态差异较大的石榴品种对32个引物进行筛选,引物S19、S1443、S2083、S2144
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