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目的:观察反式白藜芦醇(trans-resveratrol,TR)诱导的小鼠肺纤维化新模型在8周内的动态变化,并以博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化模型为参照,归纳其特点和规律。通过对比炙甘草汤和麦门冬汤分别对两模型纤维化相关指标的干预结果,分析肺纤维化相关指标与主要证候要素的关系,初步阐述两个模型的证候要素特点。方法:1动物模型的复制:用正常健康ICR小鼠分别复制两个肺纤维化模型,并对其进行8周的动态观察。模型制备方法:TR模型,连续灌胃给药4周;BLM模型,一次性气管内注射给药。观测时间点为实验开始后第1、2、4、5、6和8周。统计各时间点动物的体重、肺脏器官系数及死亡率,评估动物的生长发育水平、肺部病变程度及生存情况;通过观察苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色的病理切片结果,评判模型是否复制成功,并评估纤维化的进展情况;采用碱水解法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,测定肺组织中胶原含量。2两个模型的动态变化及特点比较:收集小鼠肺泡灌洗液(BALF),使用全自动血液分析仪对其进行细胞分类与计数,统计BALF中不同种类白细胞的数量及变化,评价模型炎症水平;采用生化法测定肺组织内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及丙二醛(MDA)的水平,评估两个模型的氧化应激水平;通过ELISA法定量检测肺组织内TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-12p70和IL-13的蛋白表达水平,评价两个模型中与纤维化相关细胞因子的表达水平。3炙甘草汤和麦门冬汤对两个模型的疗效比较:对造模4周的小鼠分别灌胃炙甘草汤与麦门冬汤水煎剂,连续给药4周,每个模型均接受两方的分别治疗。指标测定和分析同方法1和2。结果:1 TR模型复制成功:(1)TR模型体重减轻,死亡率为0%,肺系数与对照组相比没有明显区别。(2)HE染色结果显示,TR模型的肺组织轻度出血,可见肺泡间隔增厚、肺泡壁炎性细胞浸润和纤维化,且程度随时间的延长而加重;Masson染色结果显示,TR模型在肺间质、肺泡隔和支气管周围区域有胶原沉积,且程度随时间的延长而加重;纤维化评分结果显示,TR模型明显高于对照组(P<0.0001)。(3)HYP含量测定结果显示,TR模型肺组织中胶原含量明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.0001)。2 TR模型与BLM模型相比,炎症表现更轻微,纤维化程度轻而平稳:(1)BALF中细胞分类与计数结果显示,TR模型的白细胞数量与对照组基本持平,低于BLM模型,且单核细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的比例总体保持稳定。(2)TR模型的SOD和GSH-PX活力水平均明显低于对照组(P<0.0001);MDA水平则在5～8周出现上升,明显高于同期BLM模型的水平(P<0.01)。(3)TR模型和BLM模型与对照组的IFN-γ、IL-13和IL-12p70的表达水平不同(P<0.01),但总体趋势复杂且不规则;其中IL-4和TNF-α的变化趋势在对照组与两个模型之间无明显差异。两个模型的IL-12p70/IL-13的比值均始终小于1,且都低于对照组的比值;IFN-y/IL-4比值在三组之间则没有显著差异。3对TR模型而言,炙甘草汤的治疗效果优于麦门冬汤;对BLM模型而言,两组方药的治疗效果均不如TR模型:(1)TR模型的麦门冬汤治疗组体重明显高于同条件下的BLM模型治疗组(P<0.01);经两方治疗后,TR模型的肺系数出现不同程度的上升,而BLM模型则出现相反的变化趋势。(2)两个模型在治疗后,病理学改变均出现好转,肺泡炎和纤维化程度下降,肺泡隔变薄,胸膜病变由弥漫性缩小为局灶性,其中BLM模型两个治疗组的变化更明显。但纤维化程度评分结果显示,各治疗组之间没有明显差异。(3)经治疗后的TR模型和BLM模型,肺组织内HYP含量均未出现明显下降,与对照组相比,麦门冬汤治疗后的两模型HYP含量出现了上升(P<0.0001)。(4)TR模型经炙甘草汤治疗后,BALF中白细胞数量没有明显变化,且远低于同处理条件下的BLM模型(P<0.0001);TR模型经麦门冬汤治疗后则出现相反表现,但差异并无统计学意义。单核细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的计数结果与白细胞计数结果总体一致。(5)TR模型组经炙甘草汤治疗后,其SOD活力水平没有明显提高,经麦门冬汤治疗后则相反(P<0.01),而BLM模型经两方治疗后SOD活力均有不同程度下降;TR模型-炙甘草汤组的GSH-PX活力水平低于TR模型-麦门冬汤组,而BLM模型经两方治疗后,GSH-PX水平与对照组相比明显下降(P<0.0001);炙甘草汤和麦门冬汤均能降低两模型肺组织中MDA水平,其中治疗后的TR模型下降幅度比同条件下的BLM模型更为突出(P<0.0001)。(6)各治疗组的IFN-γ水平没有出现明显变化,而IL-13水平均出现不同程度的下降,其中TR模型经治疗后的下降幅度更为明显(P<0.05);IL-4水平在经炙甘草汤和麦门冬汤治疗后的TR模型中分别出现轻微上升和下降,在同条件下的BLM模型中则均出现明显下降(P<0.05);IL-12p70水平在4个治疗组中均出现了显著下降,其中BLM模型-炙甘草汤组与未治疗组相比差异最大(P<0.0001);TNF-α水平在TR模型的炙甘草汤和麦门冬汤治疗组中分别出现小幅下降和上升,而BLM模型经治疗后较对照组出现明显下降(P<0.05)。在两个模型中,炙甘草汤的治疗使IFN-γ/IL-4比例下降,而麦门冬汤的治疗使这一比例上升,但差异均无统计学意义;炙甘草汤和麦门冬汤对IL-12p70/IL-13比例的影响则因模型不同而出现差异,TR模型中表现为炙甘草汤组低于麦门冬汤,而BLM模型则相反。(7)总体表明,炙甘草汤对两个模型的治疗效果优于麦门冬汤,且对TR模型的治疗效果更好;TR模型比BLM模型恢复程度更高。结论:1 TR诱导的小鼠肺纤维化模型与BLM模型相比,其肺纤维化表现平稳且程度较轻,在8周内没有自行恢复,也没有明显炎症表现,与人类特发性肺纤维化早期亚临床阶段有相似之处。恢复期的TR模型倾向于阳虚为主,阴虚为辅的证素;BLM模型小鼠的表现则倾向于阴虚证素。2炙甘草汤和麦门冬汤对同一动物模型的治疗效果不同,TR模型和BLM模型对同一组方药的反应也不同。炙甘草汤在改善肺组织纤维化方面的表现优于麦门冬汤,而在缓解炎症和氧化应激水平方面则不如后者。3 TR模型的表现与炙甘草汤的适应症更为契合,也与肺纤维化的早期隐匿症状更为接近;麦门冬汤对BLM模型的治疗效果略胜一筹。这再次提示TR模型和BLM模型对应的中医证候要素有差异。TR模型若能得到更为透彻分析,将能成为人类IPF的中医药研究中又一个可选择的动物模型。