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目的：建立稳定表达野生型GP IIb/Ⅲa和突变型GP IIb/ⅢaT1565C的中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary，CHO)细胞系，探讨GPⅢaT1565C点突变在细胞信号转导磷酸化中的作用。
方法：采用脂质体介导基因转移法将真核表达载体pcDNA3.1(+)IIb与pcDNA3.1(+)Ⅲa或pcDNA3.1(+)ⅢaT1565C共转染到CHO细胞中，经G418筛选出稳定表达野生型GP IIb/IlIa和突变型GP IIb/ⅢaT1565C的CHO细胞系。流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测转染的CHO细胞表面CD41和CD61的表达。免疫沉淀、免疫印迹(Western blot)和FCM细胞内染色等方法检测野生型和突变型GP IIb/IlIa CHO细胞经纤维蛋白原(fibrinogen，Fbg)激活后发生的粘着斑激酶(focal adhesion kinase，FaK)酪氨酸磷酸化和FAK丝氨酸910磷酸化位点[FAK(Ps910)]磷酸化。
结果：FCM检测转染的CHO细胞其表面CD41和CD61均高效表达，分别为97.19%和99.71%。免疫沉淀、Western blot检测野生型和突变型GP IIb/ⅢaCHO细胞经Fbg激活90min分别有16.24%和20.44%的FAK发生酪氨酸磷酸化：FCM细胞内染色检测其经Fbg激活90min不发生FAK(Ps910)磷酸化，激活48h分别有34.89%和73.84%发生FAK(Ps910)磷酸化。
结论：成功构建稳定表达野生型GP IIb/Ⅲa和突变型GP IIb/ⅢaT1565C的CHO细胞系。GPⅢaT1565C点突变能够增强细胞内信号转导关键成分FAK酪氨酸磷酸化和FAK(Ps910)磷酸化，进而增强GP IIb/Ⅲa介导的细胞外向内信号转导功能。