一、目的1.建立从人脐带中分离间充质干细胞的方法。2.培养脐带间充质干细胞，研究其相关生物学特性。3.建立从脐带血中分离造血干细胞的方法。二、方法1.用灭菌瓶采集新生儿脐带，采用组织块分离培养法分离培养间充质干细胞。2.取第3-5代细胞进行相关生物学特性分析：生长曲线分析；细胞周期；流式鉴定细胞表面标记；成骨，成脂诱导。3.无菌采集新生儿脐带血；采用免疫磁珠吸附法从脐带血中分离造血干细胞。三、结果1.成功分离出呈典型梭形纤维状生长，生长集落后成旋涡状的间充质干细胞；2.细胞生长曲线图示，说明细胞生长速度快，增殖能力强，符合间充质干细胞增长特点；3.周期检测表明分离的间充质干细胞处于G0/G1期的细胞占93.29%，处于G2/M期的细胞占5.26%，S期细胞占1.45%；说明大多数细胞处于静息期，保留了自我更新和分离能力，符合干细胞特性；4.流式检测细胞表面抗原标志物，CD29、CD105强表达；阴性表达CD34、HLA-DR；5.获得的间充质干细胞成骨诱导后，被茜素红染色，显示有钙结节形成；成脂诱导后，油红O染色，显示有脂肪滴形成，说明成骨成脂诱导成功；6.流式细胞仪检测免疫磁珠过磁架分离脐血中CD34造血干细胞占88.3%，未过磁架分离的占2.6%；四、结论本实验室通过无菌组织块分离法分离出的细胞，以细胞形态学观察、绘制细胞生长曲线、细胞周期、流式免疫鉴定、成骨成脂鉴定的生物学方法，确认为间充质干细胞；通过免疫磁珠吸附法可以成功分离出高纯度的CD34+造血干细胞。