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目的观察昆明小鼠在烫伤、脓毒症及烫伤脓毒症病理状态下外周血Th1、Th2的变化,及其ANXA1、GATA-3、T-bet蛋白和mRNA的表达,探讨ANXA1、GATA-3在烧伤脓毒症中的免疫调控机制,寻找烧伤脓毒症免疫抑制中的关键性分子,为发现药物新靶点并有效防治脓毒症提供研究基础。方法1.采用SPF级雄性昆明小鼠,体重35-40g,用随机数字表法分为对照组、烫伤组、内毒素注射组及烫伤脓毒症组,制造20%深II度烫伤模型,分别于伤后12h、24h、48h和72h取小鼠外周血待检测。2.样本分别以CD4+IFN-γ+及CD4+IL-4+T细胞标记Thl和Th2细胞,并观察Th1细胞和Th2细胞的比例及Th1/Th2平衡的偏移状况。再将Th1/Th2细胞设门进行ANXA1、GATA-3、T-bet的检测。3. RT-PCR法检测外周血淋巴细胞中ANXA1、GATA-3、T-bet mRNA的表达。4.数据录入Excel表格进行统计处理,应用SPSS统计软件处理实验数据。结果1.流式细胞检测烫伤组小鼠Th1、Th2细胞比值在伤后12h和24h逐渐下降,48h和72h缓慢回升,而内毒素注射组及烫伤脓毒症组小鼠Thl细胞和Th2细胞比值持续下降,且Thl/Th2平衡向Th2方向偏移。与对照组比较差异显著(P<0.05)。烫伤组小鼠伤后24h后外周血Thl和Th2细胞中ANXA1与GATA-3的表达率低于对照组(P<0.05),并从24h起缓慢上升。T-bet的表达率在伤后12h和24h下调,伤后48h和72h又高于对照组。内毒素注射组Th1和Th2细胞中ANXA1和GATA-3未出现类似烫伤组的上升趋势,伤后持续下调(P<0.05)。而T-bet表达率伤后即开始出现明显上升。烫伤脓毒症组Thl和Th2细胞中ANXA1、 GATA-3、T-bet分子表达率在伤后全面持续下调(P<0.05)。2. PT-PCR结果烫伤组小鼠ANXA1、GATA-3和T-bet mRNA表达量伤后开始下降,并于伤后24小时降至最低,随后表达上调,但ANXA1和GATA-3在其后各时相点仍低于对照组(P<0.05),而T-bet的表达量却在其后两个时相点明显高于对照组。内毒素注射组小鼠伤后ANXA1和GATA-3mRNA的表达量一直处于下降趋势(P<0.05),而T-bet的表达量从12h起逐渐增多。烫伤脓毒症组小鼠ANXA1、GATA-3和T-bet mRNA表达量从12h至72h逐渐下降(P<0.05)。3.相关性分析采用Pearson相关性分析的方法,分别对流式细胞术检测Th1、 Th2细胞中ANXA1与GATA-3的表达率,以及PCR检测外周血ANXA1与GATA-3mRNA的表达量进行相关性分析,前者相关系数分别为0.747和0.787,后者相关系数为0.862,P<0.05。结论1.烫伤组、内毒素注射组及烫伤脓毒症组小鼠Thl/Th2平衡向Th2方向偏移,烫伤脓毒症组更为明显。2.烫伤组、内毒素注射组及烫伤脓毒症组小鼠Th1、Th2细胞ANXA1和GATA-3以及淋巴细胞ANXA1和GATA-3mRNA表达下降,烫伤组于24h起逐步回升,但内毒素注射组及烫伤脓毒症组持续下调,且烫伤脓毒症组更为明显。T-bet及其mRNA在烫伤组及内毒素注射组出现上调,而在烫伤脓毒症组出现持续下调。3. ANXA1和GATA-3及其mRNA的表达变化具有相关性,说明它们可能参与了Th1/Th2平衡向Th2方向偏移的病理生理过程。