1.白藜芦醇对大鼠早期卵泡发育及卵母细胞凋亡的影响 2.阴道毛滴虫RRas基因的cDNA克隆和原核表达

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研究目的研究白藜芦醇对大鼠早期卵泡发育及卵母细胞凋亡的影响。材料与方法成年Sprague-Dawley(SD)大鼠合笼,新生鼠随机分三组:对照组、母鼠灌胃组、腹腔注射组。对照组为正常出生1d、2d和4d龄大鼠;母鼠灌胃组为正常怀孕的SD母鼠在孕12d开始白藜芦醇(25mg/kg·d)灌胃,直至分娩,其新生鼠在1d、2d和4d龄取卵巢;腹腔注射组为正常出生大鼠在生后12h内开始腹腔注射白藜芦醇(25mg/kg·d),分别在2d、4d龄取其卵巢。所取卵巢经固定、脱水、包埋后切片,应用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色及末端脱氧核苷酰基转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL)观察白藜芦醇对大鼠早期卵泡发育及凋亡的影响。结果1d龄大鼠母鼠灌胃组卵母细胞巢内卵母细胞比例为69.42%,低于对照组的82.49%;其原始卵泡的比例为30.47%,高于对照组的18.13%,差异均有统计学意义(p<0.05)。2d龄大鼠母鼠灌胃组和腹腔注射组卵母细胞巢内卵母细胞所占比例分别为53.20%和39.78%,均明显高于对照组的15.76%;原始卵泡、发育卵泡所占比例分别为46.40%和4.51%、57.64%和2.58%,低于对照组的74.57%和9.67%,差异均有统计学意义(p<0.05)。4d龄大鼠母鼠灌胃组和腹腔注射组卵母细胞巢内卵母细胞所占比例为5.39%和9.39%,明显高于对照组的2.62%,差异有统计学意义(p<0.05);原始卵泡、发育卵泡所占比例分别为63.22%和30.77%、66.50%和24.11%,与对照组相比,差异没有统计学意义(p>0.05)。1d龄母鼠灌胃组大鼠卵母细胞的凋亡率为10.29%,与对照组4.43%相比,差异有统计学意义(p<0.05)。2d龄母鼠灌胃组和腹腔注射组卵泡凋亡率分别为9.88%和12.95%,此时对照组大鼠卵泡凋亡率为8.50%,差异无统计学意义(p>0.05)。结论白藜芦醇可以延缓大鼠卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的启动发育;白藜芦醇可能促进卵母细胞的凋亡。研究目的克隆和表达阴道毛滴虫RRas(TvRRas)基因,以便进一步探讨其定位及功能。材料与方法应用PCR方法从构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增TvRRas基因片段,克隆至pGEM-T载体,经PCR、酶切和测序鉴定后亚克隆至原核表达载体pET-41a,转化大肠埃希菌(Ecoli)BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍-硝基三乙酸(Ni-NTA)柱纯化表达产物后用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定。结果从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的TvRRas基因片段长522bp,酶切及DNA测序证实pET-41a/TvRRas重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为45kDa。结论成功构建重组原核表达质粒pET-41a/TvRRas,并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期一致。
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