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结核病是传染病中继艾滋病之后的第二大杀手,目前成为严重的公共卫生问题。卡介苗(BCG)作为目前世界上许多国家唯一批准应用于人体的抗结核疫苗已经用了80多年了,然而在不同地区的人群中,BCG对青少年和成人的保护效果有明显的差异,BCG对成人结核病效果甚微。因此,探索新的疫苗免疫策略是控制结核病的重要手段。目前,亚单位蛋白疫苗是最有发展前景的新型疫苗之一,在小鼠等动物模型中,用这类疫苗强化免疫BCG初免可以诱导出较好的免疫保护效应。经研究证实,融合蛋白Ag85B-Mpt64190-198-Mtb8.4 (AMM)和佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)、卡介苗多糖核酸(BCG PSN)构建的亚单位疫苗较为理想,强化BCG初始免疫能够诱导出强的免疫保护效应。然而,强化免疫策略的免疫程序还有待研究。目的：本研究用AMM、DDA、BCG PSN构建的亚单位疫苗强化BCG初始免疫,对免疫接种次数及时间不同对小鼠模型免疫效应和保护效应的影响进行比较研究,以便获得一个具有最佳免疫保护效应的免疫接种程序。方法：1.BCG初免,AMM亚单位疫苗10周后强化免疫一次或8、10周强化免疫两次的免疫效应比较。将AMM、DDA和BCG PSN混合构建AMM亚单位疫苗。实验组1：BCG初免后第10周用AMM亚单位疫苗加强免疫小鼠一次；实验组2：BCG初免后于第8、10周分别用AMM亚单位疫苗加强免疫。设立生理盐水和仅BCG免疫两个对照组。BCG初免后第14、22周,用ELISPOT、ELISA技术检测小鼠的细胞及体液免疫反应,第22周用BCG活菌模拟攻击被免疫小鼠,26周用流式细胞术和ELISA技术检测T细胞分型及体液免疫反应。2.BCG初免,AMM亚单位疫苗10周后强化免疫一次、8、10周强化免疫两次和6、8、10周强化免疫三次的免疫效应和保护效应比较。实验组1、2免疫程序同上述,另增加实验组3：BCG初免后于第6、8、10周分别用AMM亚单位疫苗加强免疫。设立PBS及仅BCG免疫两个对照组。BCG初免后第14周应用ELISPOT、ELISA技术检测免疫小鼠的细胞及体液免疫反应。第22周用H37Rv毒株攻击被免疫小鼠,间隔6周后检测小鼠体内结核菌载量,分析组织病理切片。结果：1.AMM亚单位疫苗8、10周加强免疫两次诱导分泌IFN-γ的能力强于10周时加强免疫一次；加强免疫两次组的IgG1抗体滴度明显高于加强免疫一次组,而作为反映Thl型免疫反应指标的IgG2a/IgG1比值,强化免疫两次组低于强化一次组；BCG模拟攻击被免疫小鼠后,加强免疫一次或两次组的CD4+CD25+T细胞含量均高于仅BCG免疫组。2.AMM亚单位疫苗8、10周加强免疫两次诱导分泌IFN-γ的能力强于加强免疫一次和三次；IgG1抗体滴度与加强次数成正比,IgG2a抗体水平与加强次数关系不大,强化的次数越多,反映Th1型免疫反应的IgG2a/IgG1比值越小；加强免疫两次比一次和三次对抗结核菌的能力强,细菌载量最少；组织切片观察得出AMM亚单位疫苗加强BCG没有加重小鼠脏器的病理损伤。结论：BCG初免,8、10周时用AMM亚单位疫苗加强免疫两次能够引起较强的细胞及体液免疫反应,可以诱导出较强的保护效应。6、8、10周加强三次的免疫保护效果没有超越加强两次。加强的次数增多会引起Th2型免疫反应加强。AMM亚单位疫苗加强BCG的免疫策略没有加重小鼠的病理损伤。