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目的核转录因子Kappa B(NF-κB)是在上世纪八十年代发现的一种能够与DNA特异性位点结合,并调控基因转录的蛋白质复合体。它与细胞中的绝大多数基因转录、表达密切相关,尤其是在肝移植后早期就发生的缺血再灌注损伤中,NF-κB起着举足轻重的作用。核糖体蛋白S3(ribosomal protein S3,RPS3)最初被认为是核糖体的亚单位,参与蛋白质翻译。近年发现,它是NF-κB复合体的必需功能亚单位,在NF-κB介导的基因转录过程中具有关键性作用,这有可能成为NF-κB信号通路中又一突破性认识。本实验拟采用RNA干扰技术沉默供体肝脏内RPS3基因的表达,观察其对NF-κB活性及表达量的影响,以及对肝移植后早期缺血再灌注损伤(I/RI)的保护作用,探讨RPS3在肝移植后早期I/RI中的作用机制。方法构建以腺病毒(Ad)为载体的RPS3基因特异性短发夹RNA(shRNA)表达颗粒。将成年雄性SD大鼠随机分为三组,采用改良的Kamada袖套法于各组建立大鼠原位肝移植动物模型。将实验大鼠随机分为三组:(1)RPS3基因特异性短发夹RNA处理组(Ad-RPS3 -shRNA)、(2)空白腺病毒对照组(Ad-blank-control)、(3)生理盐水对照组(NS-control)。于肝移植前48h分别用目标病毒表达颗粒、空白腺病毒载体、生理盐水经门静脉灌注三组供体大鼠肝脏;建立肝移植模型,后于肝脏恢复灌注3h、12h两个时间点各处死受体大鼠6只。经上腔静脉收集血液标本及相同部位肝脏组织标本备用。全自动生化分析仪检测血清ALT、AST水平;光镜下双盲法以Suzuki评分标准对各肝脏组织病理改变评分;ELISA法检测各标本血浆炎症因子TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平;qRT-PCR法检测各组大鼠肝脏组织中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、RPS3 mRNA水平;Western blot法检测肝脏组织中NF-κB蛋白水平;EMSA法检测肝脏组织中NF-κB蛋白活性。结果肝功指标:肝移植恢复灌注3h、12h Ad-RPS3-shRNA组ALT、AST(725.9±67.3 U/L,1842.7±176.6 U/L;863.7±72.7 U/L ,1513.4±187.6 U/L)显著低于Ad-blank-control组(1736.5±173.7 U/L, 3232.6±273.1 U/L;1874.6±163.7 U/L,3149.1±282.6 U/L)与NS-control组(1472.2±178.4 U/L,3347.6±293.5 U/L;2109.3±188.7 U/L,3662.4±269.6 U/L),并且与这两组间相比差异有统计学意义(P < 0.01);Ad- blank-control组与NS-control组间无显著差异(P > 0.05)。肝脏组织病理改变评分:恢复灌注3h、12h Ad-RPS3-shRNA组Suzuki评分(3.72±0.31,3.94±0.34)均低于Ad-blank-control组(7.93±0.63,8.18±0.66)与NS-control组(8.22±0.61,8.25±0.69),并且有显著差异(P < 0.01);Ad-blank-control组与NS-control组间无显著差异(P > 0.05)。血浆炎症因子水平、肝脏组织炎症因子及RPS3 mRNA水平以及NF-κB蛋白表达量和活性,在肝脏移植后恢复灌注3h、12h,同前面两个检测指标具有相似的变化倾向。结论本实验验证了通过门静脉灌注携带目标基因shRNA的慢病毒载体,可以达到有效转染的目的,并抑制目标基因的表达;在肝移植前通过门静脉灌注Ad-RPS3-shRNA,可以显著降低肝脏细胞NF-κB活性和表达量、降低炎症因子表达减轻肝细胞损伤,说明RPS3在NF-κB介导的肝移植后早期I/RI信号通路中发挥重要作用。由此可以得出结论:沉默供体肝脏内RPS3基因可以有效减轻肝移植后早期缺血再灌注损伤。