[目的]　　 B7-H4(B7S1、B7x)是最近发现的B7家族成员，能通过抑制T细胞的增殖、细胞因子的产生和细胞周期的进程来负性调控T细胞的免疫应答，其在多种肿瘤组织中的高表达，提示其在肿瘤的发生发展中的作用，并被认为是某些肿瘤的新型肿瘤标志物。　　 本文采用免疫组织化学法检测部分肺癌及结直肠癌组织B7-H4的表达，采用重组小鼠B7-H4(mB7-H4)蛋白作为抗原制备兔抗小鼠B7-H4多克隆抗体，并建立检测人可溶性B7-H4(soluble B7-H4，sB7-H4)的ELISA夹心法，并对部分肿瘤患者血清sB7-H4水平进行检测，以探讨sB7-H4的检测对肿瘤的诊断及预后的意义，并为研究B7-H4在肿瘤发生、发展中的作用奠定基础。　　 [方法]　　 1.肺癌和结直肠癌患者肿瘤组织中B7-H4的表达　　 采用抗人B7-H4单克隆抗体作为一抗，借助免疫组织化学法检测20例肺癌和20例结直肠癌患者肿瘤组织中B7-H4的表达。　　 2.兔抗小鼠B7-H4多克隆抗体的制备及鉴定　　 用纯化的重组小鼠B7-H4蛋白作为抗原，免疫家兔，制备兔抗小鼠B7-H4多克隆抗体，并对其特异性及纯度进行鉴定。　　 3.sB7-H4 ELISA检测方法的建立　　 以抗人B7-H4单克隆抗体做为包被抗体，纯化的重组小鼠B7-H4作为参考标准品，兔抗小鼠B7-H4多克隆抗体作为捕获抗体，HRP标记羊抗兔IgG作为二抗，建立检测可溶性B7-H4的ELISA夹心法。　　 4.肿瘤患者血清sB7-H4的检测　　 用建立的检测sB7-H4的ELISA法对630例不同种肿瘤患者血清sB7-H4水平进行检测，并以正常体检者血清sB7-H4水平作为对照，分析肿瘤患者与正常体检者血清sB7-H4浓度的差异。　　 [结果]　　 1.肺癌和结直肠癌患者肿瘤组织中B7-H4的表达　　 通过免疫组织化学法检测20例肺癌和20例结直肠癌肿瘤组织B7-H4的表达，结果显示B7-H4在肺癌和结直肠癌肿瘤组织中高表达，提示B7-H4可能在肿瘤的发生、发展中起重要作用。　　 2.兔抗小鼠B7-H4多克隆抗体的制备及鉴定　　 成功制备了兔抗小鼠B7-H4多克隆抗体，经过半饱和硫酸铵初步纯化后，其ELISA效价为1:12800，多克隆抗体除与重组小鼠B7-H4蛋白结合外，还能结合人肿瘤组织中的B7-H4，其纯度及特异性均达到后续试验要求。　　 3.可溶性B7-H4 ELISA检测方法的建立　　 成功建立了sB7-H4 ELISA检测方法，检测范围在3.13μg/L～200μg/L之间，批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数分别为7.92％和11.1％，平均回收率达到了90.1％，说明该方法的准确度和精密度都较好。　　 4.肿瘤患者血清B7-H4的检测　　 用以上建立的方法对630例不同种肿瘤患者血清sB7-H4水平进行了检测，结果显示肝癌、胃癌、结直肠癌、食管癌、肺癌、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、恶性淋巴瘤患者血清sB7-H4含量均高于正常对照，而子宫肌瘤、白血病、多发性骨髓瘤患者血清sB7-H4与正常对照无差异。　　 [结论]　　 证实了B7-H4在肺癌及肠癌组织中高表达，其表达程度与肿瘤的病例分型和患者的临床分期相关；成功制备了兔抗小鼠B7-H4多克隆抗体，建立了检测sB7-H4的ELISA夹心法；初步证实了sB7-H4在多种肿瘤患者血清中含量增高。提示B7-H4有望作为一种肿瘤标志物，但有关B7-H4在肿瘤的发生发展中的作用机制尚需进一步探讨。