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目的:建立RQ-PCR检测PML-RARα转录本方法学。检测10例初治APL患者及23例缓解期APL患者的PML-RARα融合基因,探讨其临床意义。
方法:根据文献设计PML-RARα融合基因三种异构体及ABL内参基因的引物和探针,提取PML-RARα融合基因L-型、S-型及ABL内参基因转录本的阳性标准品质粒,将其进行10倍比的浓度梯度稀释,建立标准曲线,检测TaqMan实时定量PCR方法的敏感性、可信性、特异性,最终定量结果用NQ值表示。用TaqMan实时定量PCR方法,对10例初治APL患者及23例缓解期APL患者的PML-RARα融合基因表达水平进行检测,并分析其临床意义。
结果:1.建立了PML-RARα融合基因异构体L-型、S-型和内参基因ABL的标准曲线。每条标准曲线的相关系数R2均大于0.99,敏感度达10-5(1个APL细胞/105正常细胞)。2.日内差变异系数CV(标准差/平均数)为1.5%。日间差变异系数CV(标准差/平均数)为2.1%。3.10例初治.APL患者L-型和S-型、V-型PML-RARα融合基因转录本类型所占比例分别为60%、40%及零。L-型和S-型病人融合基因转录本NQ值分别为0.4741,0.5731,差异无统计学意义。4.比较初治时6例L-型4例S-型APL患者的外周血WBC分别为(0.41-59.6)×109 mmol/1、(1.3-97)×109 mmol/1,(P=0.041)。而两种基因型在性别、年龄、外周血红蛋白、血小板、骨髓幼稚细胞占有核细胞比例方面比较,差异均无统计学意义。5.在23例经治.APL患者中,3年以上生存者9例,融合基因表达率占11.1%。3年以内(含3年)生存者14例,融合基因表达率占50%。3年以上生存者融合表达、APL的复发、死亡率均低于3年内组。经统计学处理,两组间无统计学意义。
结论:1.建立了敏感性高、特异性强、稳定可靠的检测APL患者PML-RARα融合基因的RQ-PCR方法。2.L-型和S-型病人融合基因mR-NA表达量无差异。3.对缓解期APL患者进行PML-RARα融合基因检测有助于预测复发、指导临床治疗。