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一、目的围绕高血压早期肾保护,开展基础与临床研究。通过观察院内特色制剂潜阳育阴颗粒作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤模型,明确该药能否下调炎症因子表达、减轻肾脏花生四烯酸(AA)代谢紊乱;通过该药干预高血压的临床研究,证实该药是否可以改善高血压早期肾损害的相关指标;通过流行病学调查研究,寻找引起高血压肾损害的危险因素,为中医药多因素干预高血压早期肾损害提供进一步的证据。二、方法及内容(一)基础研究潜阳育阴颗粒对HUVEC细胞损伤模型活性及相关蛋白表达的影响:将SD大鼠随机分为正常组、缬沙坦胶囊组、潜阳育阴颗粒组、潜阳育阴颗粒联合缬沙坦胶囊组,每组8只,灌胃给药,其中潜阳育阴颗粒,剂量为10 g/kg/d,分2次给药,缬沙坦胶囊每日1次给药,剂量为0.027g/kg/d,连续给药7d,制备含药血清。HUVEC分为5组,除正常组外,其余组均采用AngⅡ作用于对数生长期的HUVEC建立细胞损伤模型。造模后,分别给予相应含药血清干预:对照组(10%空白血清培养液)、模型组(10%空白血清培养液)、缬沙坦胶囊组(10%缬沙坦胶囊血清培养液)、潜阳育阴颗粒组(10%潜阳育阴颗粒血清培养液)、潜阳育阴颗粒联合缬沙坦胶囊组(10%潜阳育阴颗粒+10%缬沙坦胶囊血清培养液),继续培养24 h。观察:①MTT法检测含药血清对AngⅡ诱导HUVEC损伤细胞活性的影响;②荧光显微镜观察含药血清对AngⅡ诱导HUVEC损伤细胞形态的影响;③含药血清对AngⅡ诱导的HUVEC损伤细胞活性氧生成的影响;④含药血清对内皮细胞损伤模型NF-κB p65的影响;⑤含药血清对内皮细胞损伤模型COX-1、COX-2的影响;⑥含药血清对内皮细胞损伤模型PGES及PGIS的影响。结果:①不同药物的含药血清干预后,结果显示:与对照组相比,模型组HUVEC细胞存活率显著降低(P<0.01),给予含药血清干预后,各组细胞存活率与模型组相比显著升高(P<0.01),潜阳育阴颗粒与缬沙坦胶囊联合用药组较缬沙坦胶囊组的活细胞数目更高(P<0.01)。③与对照组相比,模型组细胞活性氧水平显著升高(P<0.01)。给予含药血清后,各给药组活性氧水平显著降低(P<0.01),且联合用药组对HUVEC损伤细胞模型的活性氧水平降低最为显著(P<0.05)。④模型组细胞NF-κBp65蛋白表达的水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,各给药组NF-κBp65蛋白表达水平显著降低(P<0.01),联合用药组较缬沙坦胶囊组NF-κBp65蛋白表达水平降低明显(P<0.05)。⑤各组间相比,COX-1蛋白表达水平无显著差异(P>0.05);与对照组相比,模型组细胞COX-2蛋白表达的水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,各给药组COX-2蛋白表达水平显著降低(P<0.0[),联合用药组COX-2蛋白表达水平降低更加明显(P<0.01)。⑥与模型组相比,各给药组PGES及PGIS蛋白表达水平显著降低(P<0.01),其中,联合用药组较缬沙坦胶囊组降低PGIS的表达有统计学差异(P<0.01)。结论:①潜阳育阴颗粒含药血清可以提高AngⅡ诱导HUVEC损伤细胞的存活率,降低活性氧的水平;②潜阳育阴颗粒可以减少AngⅡ诱导损伤HUVEC细胞的炎性反应,机制可能与降低NF-κB p65、COX-2炎症因子的表达有关。③潜阳育阴颗粒拮抗AngⅡ诱导损伤HUVEC细胞的机制可能与下调PGES及PGIS蛋白表达,从而可能减少致炎前列腺素的产生。④潜阳育阴颗粒和缬沙坦胶囊联合用药组保护HUVEC细胞损伤模型的作用强于单纯缬沙坦胶囊用药组。(二)临床研究潜阳育阴颗粒干预高血压早期肾损害的临床研究:选择符合年龄在35-75岁之间;原发性2或3级高血压病;中医肝火亢盛证或阴虚阳亢证;eGFR≥60ml/min/1.73m2,尿ACR正常;自愿参加试验并签署知情同意书的受试者,按照1:1的比例随机分为试验组和对照组,试验组采用潜阳育阴颗粒加西药标准降压治疗(以ACEI或ARB为基础治疗,可以联合CCB),对照组采用上述单纯西药治疗,观察周期为6个月,观察指标为:两组用药前后尿微量白蛋白、尿ACR、eGFR、NGAL、KIM-1、IL-18以及人口学资料、生命体征、生化指标等,采用SPSS 20.0软件进行统计分析两组间比较,采用两个独立样本均数T检验,组内比较采用配对T检验。结果:①给药前试验组与对照组在人口学特点、生命体征、生化指标,尿微量白蛋白、尿ACR、eGFR等数据两组比较差异均无统计学意义,说明两组基线均衡有可比性。②给药观察6个月后,两组人口学特点、生命体征、生化指标,尿微量白蛋白、尿ACR、eGFR的组间比较差异无统计学意义。尿微量白蛋白指标的组内配对T检验结果显示,试验组x±sd为(9.578±25.871)mg/L,P值为0.017,前后比较差异有统计学意义(P<0.05),对照组的x±sd为(9.318±65.629)mg/L,P值为0.352,前后比较差异无统计学意义(P>0.05)。在改善NGAL方面,组间成组T检验比较结果显示,试验组入组前的x±sd为(155.961±62.884)ng/ml,对照组入组前x±sd为(172.625±88.3733)ng/ml,两组比较差异无统计学意义(P>0.05),给药6个月后,试验组x±sd为(131.611±46.576)ng/ml,对照组x±sd为(158.180±61.502)ng/ml,两组疗后6个月组间比较P值为0.024,差异有统计学意义(P<0.05)。组内配对T检验结果,试验组NGALx±sd为(22.5347±56.391)ng/ml,前后比较P值为0.011,差异有统计学意义(P<0.05),而对照组x±sd为(18.1929±79.2146)ng/ml,差异无统计学意义(P>0.05)。IL-18、KIM-1组间及组内比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:潜阳育阴颗粒干预6个月后,可以改善高血压患者早期肾脏损害指标NGAL的表达,同时有降低尿微量白蛋白的趋势。(三)流行病学调查研究南京社区人群高血压肾损害危险因素调查研究:纳入来源于南京秦淮区大光路社区卫生中心门诊体检系统导出的2015年1月至2016年12月诊断为高血压人群及健康人群数据,体检资料完整。采用成组T检验,以eGFR<90及≥90ml/min/1.73m2分两组,分析Height、Weight、HR、SBP、ALT、AST、TBIL、BUN、TC、HDL-C、LDL-C、TG、血WBC、RBC、PLT、Hb,以及合并冠心病、糖尿病之间的差异;以eGFR为因变量,以上述因素为自变量,采用多元线性回归分析其相关性。结果:①共纳入符合方案要求的2697例人群数据,包括健康人群1309例,高血压人群1388例,其中,单纯高血压660例,高血压合并糖尿病297例,合并冠心病124例。②在健康人群或高血压人群中,以eGFR水平分组,成组T检验比较结果显示:男女之间的eGFR值均有极显著的统计学差异(P<0.001),女性高于男性;eGFR值与BUN、UA之间呈极显著的负相关(P<0.001);与SBP呈显著的负相关(P<0.01);与TB1L之间呈负相关(P<0.05)。在1388例高血压人群中分析显示:eGFR与TG之间呈有极显著的负相关(P<0.001),合并冠心病患者eGFR下降更为明显(P<0.001)。660例单纯高血压人群组分析显示:eGFR与体重之间呈负相关(P<0.01)。高血压人群较健康人eGFR相比,呈极显著的负相关(P<0.001)。③线性多元回归分析:eGFR与LDL-C、FBG、WBC、PP之间呈负相关(P<0.05),与BUN、UA、SBP之间呈极显著负相关(P<0.001)。eGFR与RBC、PLT之间呈正相关(P<0.05)。结论:社区人群高血压肾损害危险因素流行病学调查研究发现,高血压患者影响肾小球滤过率的因素可能有体重、TG、LDL-C、SBP、PP、BUN、UA、FBG,并呈负相关;男性比女性eGFR值低;高血压人群较健康人群eGFR值低,合并冠心病者更低。