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DR基因是通过差异显示PCR法从番茄中分离的果实成熟新基因，属于生长素反应基因家族(Aux／IAAs)。DR基因在果实发育和成熟过程中，其表达受乙烯和生长素的调节，预示该基因不仅与果实成熟过程相关，并且可能参与生长素与乙烯之间的相互作用。但目前对其作用机制并不清楚，本论文拟通过在番茄中超表达DR1基因研究其对果实成熟和激素信号转导的影响，从而明确DR1基因作用的分子机理。主要研究内容及结果如下： 一、物双元超表达载体pBIN19-DR1的构建 1、异硫氰酸胍-酚-氯仿的方法从绿熟番茄果实中提取总RNA； 2、以总RNA为模板，体外反转录合成cDNA，以cDNA为模板，用高保真pfu聚合酶通过PCR扩增了全长DR1基因； 3、pfu扩增的DR1基因与经SmaI酶切的pDH51载体通过T4 DNA连接酶连接，连接产物转化感受态大肠杆菌，用PCR方法筛选阳性菌落，阳性菌落经扩大培养后提取质粒，该质粒经进一步PCR以及酶切鉴定确为重组中间载体质粒，且外源片断正向插入，命名为pDH51-DR1； 4、中间载体pDH51-DR1经EcoRI酶切获得了包含35S启动子、DR1基因、35S终止子的片段，此片段与经EcoRI酶切的pBIN19质粒连接，产物转化感受态大肠杆菌，PCR筛选阳性菌落，阳性菌落扩大培养提取质粒，该质粒经酶切及PCR鉴定确为重组植物双元表达载体质粒，命名为pBIN19-DR1。 二、再生番茄植株的获得 1、植物双元表达载体pBIN19-DR1通过冻融法转化农杆菌C55，用PCR筛选获得了含表达载体的重组农杆菌菌落，该重组菌落经扩大培养后提取质粒，质粒经EcoRI酶切进一步验证了表达载体已经转入农杆菌； 2、AlisaCring番茄种子无菌萌发获得无菌苗，切取0.5cm下胚轴或0.4×0.6大小幼嫩子叶作为外植体； 3、外植体置于芽再生培养基经28℃暗室预培养三天，用转化的工程农杆菌液侵染30min，置于芽再生培养基28℃暗室共培养两天，转入含500mg／L Carb的抑菌培养基抑菌培养一周，再在含50mg／L Kan的筛选培养基筛选重组子，重组子在芽再生培养基中培养约六周后长出抗性芽，此芽经进一步诱根培养再生出完整植株。