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早期自然流产是临床常见病,其发病机制复杂,涉及遗传、解剖、内分泌、感染、免疫、环境等诸多因素。近年来,遗传因素对早期自然流产发病的影响日益受到重视。越来越多的证据表明,遗传因素是早期自然流产发生发展的重要原因[1]。因此,了解其遗传背景对预防和治疗早期自然流产有重要意义。瘦素作为细胞因子家族的成员,参与了胎儿-胎盘单位发育的调节,在流产的发生中起到了一定的作用。瘦素的生物学效应是通过游离的瘦素与相应的受体结合后发挥的。目前研究已经证实,瘦素受体基因存在多种基因型,其基因多态性与多种疾病的发生发展相关。
本研究的目的是为了探讨瘦素受体基因多态性与早期自然流产的关系,从遗传的角度进一步了解早期自然流产的病因,从分子遗传学角度发现不明原因早期自然流产的高危人群,从而对人群进行筛选,为找出个体化预防和治疗不明原因的早期自然流产的方法提供理论基础。
资料与方法：
1、研究对象：选择2005年7月至2007年7月,来广州医学院第三附属医院妇产科就诊的早期自然流产妇女66例,符合下列条件:a.无生殖器解剖学问题；b.夫妇双方外周血染色体核型正常；c.内分泌功能正常；d.无静脉栓塞史；e.无肝肾急慢性疾病；f.排除感染因素(Torch阴性)。对照组为正常早孕妇女70例,无自然流产、死胎、妊娠期高血压疾病及胎儿宫内生长受限(FOR)等不良妊娠史,因计划生育而终止妊娠者。
2、一般情况采集：所有研究对象记录年龄、终止妊娠的孕周并测量身高体重,计算体重指数。
3、外周血DNA的提取：抽取受试者外周静脉血2ml,EDTA抗凝,用全血DNA提取试剂盒提取DNA。
4、LEPR基因Gln223Arg多态性的检测：PCR扩增：(上游引物5ACCCTTTAAGCTGGGTGTCCCAAATGA3,下游引物5AGCTAGCAAATATTTTTGTAAGCAATT3),取扩增产物测序确认。
5、血浆瘦素水平的检测：空腹抽取肘前静脉血3ml,以2000r/min离心10min后取上清液,置-80℃冰箱储存待测瘦素水平,用ELISA方法测定血清瘦素水平。
6、统计学分析：采用SPSS10.0统计软件对观察结果进行处理,x2检验LEPR基因Gln223Arg基因型是否符合Hardy-Weinberg定律,以确认样本的群体代表性。运用基因计数法计算各组基因频率和等位基因频率。两组间计数资料比较采用卡方检验,计量资料比较采用t检验。
结果：
1、两组研究对象比较,在年龄、孕周、身高、体重、体重指数方面无差异(P>0.05)2、血浆瘦素水平的检测结果早期自然流产患者血浆瘦素水平明显低于正常早孕者,两组之间比较差异有显著性意义(p<0.01)。
3、两组研究对象中LEPR基因Gln223Arg基因型和等位基因频率的分布自然流产组中LEPR基因等位基因A出现的频率(79.5％)明显高于正常早孕组等位基因A的出现频率(60％),两组之间比较差异有显著性意义(P<0.05)。
结论：
1、早期自然流产患者血清瘦素水平明显降低,说明低瘦素水平可能是早期自然流产发生的原因之一。
2、自然流产组中LEPR基因等位基因A的出现频率明显高于正常早孕组。提示LEPR基因等位基因G→A变异可能是早期自然流产患者的一个危险因素。