研究背景:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种常见的恶性肿瘤,发病率高,死亡率高,但疗效和预后差,因此,深入阐明HCC的发生发展机制以及寻找抗HCC治疗的新靶点具有非常重要的意义。近年来,与肿瘤密切相关的非编码RNA,包括微小RNA(miRNA)和长链非编码RNA(lncRNA),引起越来越多的关注。miRNA可通过调控肿瘤相关靶基因,发挥促癌或抑癌作用,密切参与调节肿瘤的发生发展。研究发现,有多种mi RNA密切参与了HCC的发生发展,其中miR-134作为一个重要的抑癌基因,可抑制HCC的生长和转移,但其作用机制尚需进一步的深入阐明。lncRNA的异常表达也与肿瘤的发生发展、远端转移及预后密切相关。其中,HULC(highly up-regulated in liver cancer)是在HCC中特异性高表达的长链非编码RNA,密切参与HCC的细胞增殖、远端转移等过程,成为抗HCC治疗的新靶点,因此有效地抑制HULC的表达和功能,无疑有助于寻找抗HCC治疗的新策略。肝X受体(liver X receptor,LXR)属于核受体超家族中的一员,有显著的抗HCC作用,但其抗HCC作用是否与调节HULC相关,目前未见报道。因此,结合文献报道和前期初步的研究结果,本课题拟通过相关实验以探讨与HCC密切相关的mi R-134通过调节肿瘤增殖相关基因FOXM1而发挥抗HCC功能的作用和机制,以及LXR通过调节lncRNA HULC而抑制HCC生长的作用和机制,从而为深入阐明HCC的发生发展机制以及寻找抗HCC治疗的新靶标提供新的实验依据。研究目的:本研究以HCC细胞为模型,探讨mi R-134与LXR抑制HCC细胞生长的作用和机制。研究内容及方法:1.采用CCK-8实验检测mi R-134对HCC细胞增殖的影响。2.Western blot和Real-time PCR法分别检测5种HCC细胞系和正常胎肝细胞L02中FOXM1和mi R-134的表达水平,经相关性分析获得二者表达的相关性。3.通过脂质体介导成熟mi R-134模拟物(mi R-134 mimic)或miR-134抑制剂(miR-134 inhibitor)瞬时转染HCC细胞,Western blot和Real-time PCR法检测FOXM1及其靶基因Cyclin D1的表达。4.应用生物信息学分析mi R-134在人FOXM1 3′-UTR的可能结合位点,构建含可能结合位点的荧光素酶报告基因质粒,通过报告基因检测,明确mi R-134与FOXM13′-UTR的直接结合。5.HCC细胞共转染miR-134 mimic与FOXM1过表达质粒,通过FOXM1回复实验进一步研究miR-134对HCC细胞增殖的影响。6.CCK-8实验检测LXR对HCC细胞增殖的影响。7.Real-time PCR检测LXR激动剂活化LXR后对HULC表达的影响。8.CCK-8实验检测过表达HULC对LXR抑制HCC细胞增殖作用的影响。结果:1.miR-134可抑制HCC细胞的增殖。2.在HCC细胞中,mi R-134的表达显著降低,而FOXM1的蛋白表达显著增强,二者存在明显的负相关性。3.mi R-134通过与FOXM1 3′-UTR的特异性结合,抑制FOXM1蛋白水平及其靶基因Cyclin D1的表达。4.过表达FOXM1后,减弱mi R-134介导的HCC细胞增殖抑制作用。5.LXR可抑制HCC细胞的增殖,过表达HULC可削弱该抑制作用。6.LXR激动剂活化LXR后,可显著下调HCC细胞中HULC的表达。结论:1.miR-134通过与FOXM1 3′-UTR的直接结合,下调FOXM1及其下游靶基因Cyclin D1,从而抑制肝细胞癌的细胞增殖。2.LXR通过下调HULC抑制肝细胞癌的细胞增殖,但具体的调控机制还需进一步的研究探讨。