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目的异烟肼（isoniazid,INH）所致肝损伤是临床常见问题,但其机制仍未完全阐释清楚。近年来在INH肝损伤研究中,发现肝脏法尼醇受体（farnesoid X receptor,FXR）的表达及活性显著降低,但肝脏FXR与INH诱导的肝损伤之间的关系未被阐明。基于此,本文拟通过体内外实验,1)明确肝脏FXR活性抑制在INH致肝损伤中的作用;2)从INH及其主要代谢物、INH与维生素B6（vitamin B6,VB6）的加合物吡哆醛异烟酰腙（pyridoxal isonicotinoyl hydrazine,PIH）及VB6中筛选潜在的FXR抑制剂;3)考察补充外源性VB6对INH肝损伤及其药动学的影响,为INH肝损伤的防治提供一定的依据。方法本论文涉及4部分的实验方法:（1）肝脏核受体FXR抑制效应在异烟肼所致肝损伤中的作用研究实验一:Wistar雄性大鼠采用INH（60、180、300及600 mg/kg）或INH（300mg/kg）加奥贝胆酸（OCA,10 mg/kg）干预1周后,收集血清、肝脏样本,测定血清生化指标并观察肝脏病理学变化;采用HPLC-MS/MS法测定血清及肝脏胆酸盐及药物浓度;采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）测定肝脏胆酸盐相关核受体、代谢酶及转运体的mRNA表达变化。实验二:在含有或不含有胆酸盐的条件下,采用INH干预HepaRG细胞或FXR过表达转染的HepaRG细胞24 h,评价INH对HepaRG细胞的毒性;INH干预HepaRG细胞不同时间后,采用Tunel染色法评价INH对HepaRG细胞凋亡的影响,并采用HPLC-MS/MS测定细胞内胆酸盐变化。（2）基于INH及其主要代谢物筛选FXR潜在抑制剂实验一:采用计算机虚拟筛选技术从INH及其主要代谢物乙酰异烟肼（ACINH）、异烟酸（INA）、乙酰肼（ACHZ）、肼（HZ）、PIH及VB6中筛选FXR受体抑制剂,并进一步采用TR-FRET FXR共激活因子检测技术进行体外活性验证;PIH干预HepaRG细胞24 h后,采用RT-qPCR测定FXR及其靶基因小异源二聚体伴侣受体（SHP）及胆固醇7α-羟化酶（CYP7A1）的mRNA表达变化。实验二:Wistar雄性大鼠分别采用INH（60 mg/kg）、VB6（60 mg/kg）、INH（60 mg/kg）+VB6（60 mg/kg）及PIH（5 mg/kg）干预16 h后,收集血清、肝脏组织、回肠组织及回肠内容物,测定血清生化指标并采用HPLC-MS/MS法测定血清及肝脏胆酸盐和血清、肝脏组织、回肠组织及回肠内容物药物浓度;采用RT-qPCR测定肝脏Fxr受体及其靶基因Shp及Cyp7a1的mRNA表达变化。（3）VB6在INH肝损伤中的作用研究Wistar雄性大鼠采用INH（300 mg/kg）或INH（300 mg/kg）+VB6（90、120及150 mg/kg）干预1周后,收集血清、肝脏样本,测定血清生化指标并观察肝脏病理学变化;采用HPLC-MS/MS法测定血清及肝脏胆酸盐及药物浓度;采用RT-qPCR测定肝脏胆酸盐相关核受体、代谢酶及转运体的mRNA表达变化。（4）VB6与INH的药动学相互作用Wistar雄性大鼠采用INH（300 mg/kg）或INH（300 mg/kg）+VB6（90、120及150 mg/kg）给药后,分别于0、10、30、60、120、180、240、360、480、720、1440 min心脏采血,采用HPLC-MS/MS测定血清中INH及其主要代谢物、VB6的浓度变化;此外,采用同样的给药方式干预Wistar雄性大鼠2 h后,收集肝脏、肾脏及回肠组织样本,测定INH及其主要代谢物、VB6的各组织浓度。结果（1）肝脏核受体FXR抑制效应在异烟肼导致的肝损伤中的作用研究肝脏病理学结果显示,INH 300及600 mg/kg可导致肝细胞局部坏死和脂肪变性肝损伤,且与对照组相比,INH 60、180、300及600 mg/kg均可使肝脏胆酸盐显著升高（p<0.05）,且INH干预后肝脏Fxr的表达和功能均降低;而INH与OCA合用后,OCA可明显缓解INH引起的肝损伤,并逆转INH所致的肝脏胆酸盐相关核受体、代谢酶及转运体的mRNA表达变化。此外,INH对HepaRG细胞具有明显的胆酸盐依赖性毒性,而在FXR过表达转染的HepaRG细胞中,INH的胆酸盐依赖性毒性消失;同时,INH引起的HepaRG细胞胆酸盐升高要早于细胞凋亡的发生。（2）基于INH及其主要代谢物筛选FXR潜在抑制剂计算机虚拟筛选结果显示,除ACHZ及HZ外,INH、ACINH、INA及PIH均可能为FXR抑制剂,但TR-FRET FXR共激活因子检测及细胞实验证实,只有PIH为FXR抑制剂,其IC50为52.7 nM;同时,体内实验证实PIH可早期抑制肝脏Fxr功能,引起肝脏胆酸盐升高。（3）VB6在INH肝损伤中的作用研究INH与VB6口服合用后,与INH组相比,VB6可显著降低血清胆酸盐及肝脏总游离胆酸盐浓度（p<0.05）,并缓解肝脏病理学损伤;且VB6可上调肝脏核受体Fxr的表达,并逆转INH引起的胆酸盐相关代谢酶及转运体的mRNA表达变化;此外,VB6可呈现剂量依赖性的降低肝脏PIH的含量。（4）VB6与INH的药动学相互作用INH与VB6口服合用后,与INH组相比,VB6可显著减少INH、ACINH及INA的药时曲线下面积（AUC）及肝脏组织的分布（p<0.05）,增加INH、ACINH及INA的体内清除率（p<0.05）。然而,与INH组相比,VB6能显著增加PIH的AUC（p<0.05）,减少PIH的肝脏组织分布（p<0.05）。结论本研究通过体内外实验证实,（1）INH可降低肝脏FXR的表达及活性而引起肝脏胆酸盐蓄积,这可能是INH肝损伤的早期阶段;（2）INH与内源性VB6的形成的加合物PIH为FXR的强效抑制剂,可早期抑制肝脏FXR的活性并导致肝脏胆酸盐浓度升高,PIH为INH肝损伤中导致肝脏胆酸盐蓄积的主要物质;（3）在INH给药的同时,补充外源性的VB6后,可显著减少INH的AUC及肝脏PIH的含量,增加肝脏FXR的表达及功能,缓解INH引起的肝损伤。