【摘 要】
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研究目的:通过构建大鼠颞下颌骨关节病氧化应激模型,探讨活性维生素D3(1,25(OH)2D3)缺乏与颞下颌关节病的相关性。研究方法:使用胰酶+胶原酶消化法提取大鼠颞下颌关节软骨细
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研究目的:通过构建大鼠颞下颌骨关节病氧化应激模型,探讨活性维生素D3(1,25(OH)2D3)缺乏与颞下颌关节病的相关性。研究方法:使用胰酶+胶原酶消化法提取大鼠颞下颌关节软骨细胞,甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色鉴定髁突软骨细胞,通过CCK8染色及细胞β-半乳糖苷酶(β-gal)染色筛选合适的过氧化氢(H2O2)浓度来建立大鼠颞下颌关节软骨细胞氧化应激模型。采用基因沉默的方法于体外构建维生素D受体缺乏的大鼠颞下颌关节病模型。在H2O2刺激下,检测正常组大鼠和干扰组大鼠髁突软骨细胞蛋白中的氧化及抗氧化指标水平,细胞内活性氧(ROS)水平,炎症相关因子蛋白表达水平。再向上述培养体系中加入1,25(OH)2D3,观察各组中氧化及抗氧化指标水平,ROS水平和炎症相关因子蛋白表达水平。实验结果:实验发现细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原蛋白细胞化学染色均呈阳性,CCK8及β-gal染色测定H2O2最适宜浓度为100μ mol/L,VDR基因沉默组中氧化应激指标水平,ROS水平,炎症相关因子蛋白水平均高于正常细胞组,抗氧化指标水平低于正常细胞组,在向各组中加入1,25(OH)2D3后,氧化应激指标水平,ROS水平,炎症相关因子蛋白水平均明显减少,抗氧化指标水平明显增加。结论:本研究发现1,25(OH)2D3缺乏使得大鼠颞下颌关节软骨中氧化应激指标水平,ROS水平和炎症因子相关蛋白水平上升,抗氧化指标水平降低。
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