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随着社会的进步,生活节奏的加快,人们对身体健康的忽视,导致不良生活方式的产生和体育锻炼时间的减少,以及高脂高糖高蛋白的摄取,致使“三高”症状、甚至心血管疾病(如动脉粥样硬化等)的频发和早发。对于健康生活意识的传播和相关药物的研发,已经得到越来越多的科研团队的重视。在他汀类降血脂药物中,洛伐他汀(Lovastatin,LT)是比较普遍的缓解心血管疾病的药物,但由于其脂溶性的特性,在血液中的溶药率低,被人体吸收量少;没有靶向性,不能特异性针对血管受损区,增加了肝脏的负担;没有药物缓释的特性,不能持续给药,在血液当中停留时间短等问题。为此,科学家们已提出了多种策略来解决其所存在的缺陷,利用脂蛋白来包裹他汀类药物即是比较有潜力的一种策略。脂蛋白是存在于人体血液中的一类内源性的脂质-蛋白质复合物,具有磷脂单分子层,构成了疏水性的核心和亲水性的外壳;外表镶嵌的载脂蛋白具有识别作用,在血管内能靶向性的运输胆固醇。其中高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)具有载脂蛋白A-1(ApoA-1)能被清道夫受体识别,将周围组织中的胆固醇运送到肝脏代谢并排出到体外,从而降低血脂,是一种抗动脉粥样硬化的脂蛋白,俗称“血管清道夫”。利用这一特性,人工构建重组高密度脂蛋白(rHDL),加以其他修饰,可以达到靶向性、缓释性和同源性等目的。以rHDL为药物载体运送他汀类药物是近几年兴起的研究热点,但在血液滞留时间和缓释性等方面还有待提高。利用单唾液酸神经节苷脂(GM1)修饰rHDL有望实现这个目标。神经节苷脂GM1是内源性的细胞膜组成成分之一。已有研究报道,脂质体表面修饰GM1能延长其在血液循环中的停留时间,也能减少肝脏对脂质体的摄取。本课题首次使用GM1修饰的rHDL作为药物载体来运送洛伐他汀,对该药物-载体复合物(GM1-LT-r HDL)进行了制备和鉴定以及初步的抗动脉粥样硬化的药效检测。(1)利用薄膜分散法制取脂质运载体,进一步用GM1和ApoA-1修饰,并添加药物后得到GM1-LT-rHDL。外源添加的ApoA-1可以给予重组脂蛋白一定的靶向性,将药物运送到受损斑块区。外源添加的GM1能够插入到脂质层,形成类细胞膜表面结构,起到缓慢释放药物等的作用,同时减少肝脏的摄取。(2)通过Zeta粒径仪和透射电子显微镜对GM1-LT-rHDL的形貌和尺寸进行了检测,测得其粒径117.1±3.6 nm,Zeta电位41.97±1.57 mV。(3)以硅珠和巨噬细胞为模型,利用分子间的特异性结合(GM1/CTB,ApoA-1/anti-ApoA-1),通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和荧光显微镜等仪器确证了GM1-LT-rHDL中含有GM1和ApoA-1分子,进一步验证了GM1-LT-rHDL的成功构建。(4)通过高效液相色谱仪,测得其包封率为76.55±0.41%,载药量为3.83±0.02%。(5)体外药物释放的实验,验证了GM1-LT-rHDL具有缓慢释放药物的能力。(6)体外细胞实验证实,GM1-LT-rHDL能够通过ApoA-1被巨噬细胞表面的清道夫受体SR-BI识别,且对巨噬细胞吞噬Ox-LDL转变成泡沫细胞的过程(动脉粥样硬化发生和发展的关键步骤)有抑制作用。(7)药物注射动脉粥样硬化模式小鼠(高脂喂食的ApoE-/-小鼠),通过全自动生化仪检测血脂,以及对动脉用油红O染色的横向切片和纵向解剖观察斑块区大小,证实GM1-LT-rHDL不仅能够降低小鼠的血脂,而且还能抑制动脉斑块的形成。本课题成功实现了该药物-载体复合物(GM1-LT-rHDL)的制备和鉴定以及初步的抗动脉粥样硬化的药效检测,但对于其在动物体内的代谢、组织中的分布等有待后续深入研究。基于GM1修饰的rHDL药物载体系统不但可运送洛伐他汀等治疗心血管疾病(如动脉粥硬化)的他汀类药物,还可作为运送治疗其他疾病的脂溶性药物的载体系统,后续可在这方面开展进一步研究。