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目的:基于TGF-β1/Smad通路探讨参仁活血颗粒抗大鼠肝纤维化的作用机制。方法:1、造模及干预:选择50只6周龄清洁级雄性SD大鼠,普通饲料适应性饲养1周后,按随机数字表法分成5组:空白对照组、模型对照组、中药低剂量、中药中剂量、中药高剂量,每组各10只,均给予普通饲料饲喂。空白对照组给予生理盐水1ml/kg,腹腔注射,2次/周,共8周;模型对照组给予40%四氯化碳0.2ml/100g,腹腔注射,2次/周,共8周;中药低剂量组造模第4周开始给予0.5倍等效剂量参仁活血颗粒灌胃,第8周处死;中药中剂量组造模第4周开始给予1倍等效剂量参仁活血颗粒灌胃,第8周处死;中药高剂量组造模第4周开始给予2倍等效剂量参仁活血颗粒灌胃,第8周处死。2、各组SD大鼠第8周称重处死后取肝脏组织检测:病理检测:HE染色、Msson染色,免疫组化:Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TGF-β1,RT-PCR:TGF-β1、Smad3、Smad7,Western-blot:TGF-β1、Smad3、Smad7。结果:1、肝脏病理组织HE及Msson染色示:(1)HE染色:与空白对照组比较,模型组可见肝小叶结构破坏,细胞索架构紊乱,伴有炎性细胞浸润,胞质疏松,肝细胞变性、坏死严重,假小叶形成(P<0.05);与模型组比较,中药各组肝细胞坏死及炎细胞浸润程度明显减轻,纤维结缔组织增生减少,以中药高剂量组最为显著,中药中剂量组次之(P<0.05);(2)Masson染色:与空白对照组比较,模型组大鼠肝组织中纤维明显增多,肝小叶结构破坏,大量纤维组织分割包绕肝组织,形成大小不一的假小叶(P<0.05);与模型组比较,中药各组胶原纤维间隔变细、减少,假小叶形成明显减少,肝纤维化程度显著改善,以中药高剂量组最为显著,中药中剂量组次之(P<0.05)。2、免疫组化检测结果示:CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白的阳性表达可以在各组肝细胞的细胞间质观察到,其中空白对照组汇管区呈细小颜色浅的棕黄色,为正常肝组织的少量纤维组织,无阳性表达意义,而模型组染色呈粗大深染得棕黄色,模型组染色最深,低、中、高剂量组染色均较模型组变浅,且呈现出与剂量成正相关的趋势;TGF-β1蛋白阳性的表达可以在各组肝细胞的细胞膜、细胞浆、细胞间质均可见到,主要是以细胞浆为主,其中棕黄色染色浅淡的是空白对照组,而模型组染色最深,高、中、低剂量组染色均较模型组变浅,且呈现出与剂量成正相关趋势;3、Realtime-PCR检测结果示:与正常组比较,模型组大鼠肝脏纤维化组织中Smad7mRNA表达降低,TGF-β1mRNA、Smad3mRNA表达升高(P<0.05);与模型组比较,各中药组大鼠肝脏纤维化组织中Smad7mRNA表达明显升高,以中药高剂量组效果最好,中药中剂量组效果次之(P<0.05);与模型组比较,TGF-β1mRNA、Smad3mRNA表达明显降低,以中药高剂量组效果最明显,中药中剂量组效果次之(P<0.05);4、Western-blot检测结果示:与正常组比较,模型组大鼠肝脏纤维化组织中Smad7蛋白表达明显降低,TGF-β1、Smad3蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,各中药组大鼠肝脏纤维化组织中Smad7蛋白表达明显升高,以中药高剂量组效果最好,中药中剂量组次之(P<0.05);与模型组比较,各中药组大鼠肝脏纤维化组织中TGF-β1、Smad3蛋白表达明显降低,以中药高剂量组效果最明显,中药中剂量组效果次之(P<0.05)。结论:1、40%四氯化碳0.2ml/100g处理SD大鼠可以成功诱导肝细胞受损,显微镜下观察肝脏组织HE染色及Masson染色可见肝组织纤维结缔组织增生,纤维间隔形成,部分肝组织可见假小叶形成,表明肝纤维化SD大鼠模型造模成功;2、参仁活血颗粒可明显改善肝纤维化SD大鼠肝脏组织的病理结构,减轻HF大鼠肝脏纤维变性程度及肝脏炎症;3、参仁活血颗粒可能通过抑制肝脏纤维化组织中TGF-β1、Smad3活化、上调Smad7表达水平,从而减少CollagenⅠ、CollagenⅢ的合成有关。