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背景近几十年来,侵袭性真菌感染的情况日益严峻,并伴随着较高的病死率,是院内感染的重要死亡原因之一。目前抗真菌药物仍是控制侵袭性真菌感染的主要手段;伏立康唑作为第二代三唑类抗真菌药,具有更强的靶点亲和力和抗真菌活性,已被多个指南推荐为治疗侵袭性曲霉菌感染的一线治疗药物。伏立康唑主要由肝脏CYP450酶系代谢,CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9系其主要代谢酶,ABCB1是体内主要的转运蛋白,且CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9、ABCB1存在的基因多态性能够不同程度的影响酶代谢或转运蛋白活性;稳态谷浓度是伏立康唑体内暴露剂量的评价指标,与治疗效果及不良反应密切相关;目前在伏立康唑的临床抗真菌治疗中仍存在着一些问题:1.伏立康唑治疗窗窄;2.伏立康唑个体差异显著;3.伏立康唑有较严重的不良反应;4.伏立康唑治疗费用高。伏立康唑的临床治疗受多种遗传因素及非遗传因素的影响,截止现在,尚不能完全解释伏立康唑个体差异的原因。当前亟需解决的就是探究伏立康唑显著个体差异的影响因素,从而实现伏立康唑的个体化用药。目的1、监测中国汉族血液病患者伏立康唑血清初始稳态谷浓度[(Css)min],探讨伏立康唑药代动力学特点;2、通过对中国汉族血液病患者CYP2C19,CYP3A4,CYP2C9以及ABCB1基因多态性的检测,初步了解河南省人民医院中国汉族血液病患者伏立康唑代谢酶及及ABCB1基因多态性的分布特点;3、探讨CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9等主要代谢酶以及转运蛋白ABCB1的基因多态性对河南省人民医院中国汉族血液病患者(Css)min的影响;4、探讨河南省人民医院中国汉族血液病患者临床非遗传因素对(Css)min的影响。方法1、筛选于2015年3月至2016年9月收住河南省人民医院,符合2013年《血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌病的诊断标准与治疗原则》血液病侵袭性真菌病的诊断标准,使用伏立康唑治疗或预防真菌感染并接受伏立康唑血药浓度监测的中国汉族血液病患者进行回顾性研究;2、采用高效液相色谱法(HPLC)监测伏立康唑血清谷浓度,通过全血DNA提取试剂盒提取DNA,紫外/可见光分光光度计对提取DNA进行浓度和质量的检测,并将DNA样本保存于-40℃冰箱中;3、采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对21个CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9、ABCB1等的单核苷酸多态性位点(SNPs)进行基因分型。PCR引物和单碱基延伸引物由Assay Designer软件包设计,检测过程采用Mass ARRAY系统完成。最终结果由Mass ARRAY RT软件系统实时读取,Mass ARRAY Typer软件系统完成基因分型;4、检索河南省人民医院电子病历系统,记录入选患者人口统计学资料、伏立康唑用药途径、基础疾病、合并用药、实验室检查以及SNPs分型结果和(Css)min等数据建立数据库;5、采用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计学分析,采用χ~2检验对研究中21个位点的基因分型结果进行Hardy-Weinberg平衡检验;采用SHEsis在线软件平台进行连锁不平衡分析。单因素分析采用非参数检验(两组之间采用Mann-Whitney U检验,三组间采用Kruskal-Wallis检验),定量数据之间的相关性采用Spearman秩相关检验;最优尺度回归用于确定导致(Css)min变异性的影响因素,P<0.05有统计学意义。结果1、本研究共纳入86名中国汉族血液病患者,106例次(Css)min,其中确诊侵袭性真菌病(Proven IFD)3例,临床诊断侵袭性真菌病(Probable IFD)11例,拟诊断侵袭性真菌病(Possible IFD)32例以及未确定侵袭性真菌病(Undetermined IFD)40例;(Css)min变异系数达65.8%。2、本研究中21个SNPs的次等位基因频率(Minor allele frequency,MAF)与全球MAF存在一定程度的差异性,其中rs17882687、rs12248560、rs1799853、rs2740574、rs35599367、rs10264272和rs41303343次等位基因频率(Minor allele frequency,MAF)非常低或为0;3、CYP2C19基因多态性是(Css)min变异性的重要影响因素,其中相对于快代谢型患者,(Css)min/D在存在rs4244285或rs4986893突变的(中间代谢型或慢代谢型)患者中更高,同时(Css)min/D与年龄呈正相关;4、在中间代谢型或慢代谢型患者中,年龄及rs4646437(CYP3A4)基因型是造成(Css)min/D个体间差异的影响因素;其中rs4646437的突变(CT或TT)及高年龄与较高的(Css)min/D具有相关性;在快代谢型患者中,BMI与(Css)min/D呈正相关。结论1、伏立康唑个体差异较大,(Css)min变异性显著;2、CYP2C19基因多态性是导致(Css)min变异性的重要影响因素;3、除CYP2C19基因型外,rs4646437(CYP3A4)基因型、年龄、BMI等因素的影响也需要考虑进去,特别是对于那些CYP2C19为中间代谢型或慢代谢型的汉族血液病患者。