背景糖尿病相关肾病在我国已经超过了原发性肾小球肾炎相关的慢性肾脏病,成为我国慢性肾脏疾病的首要病因。糖尿病肾病的发生与发展有着复杂的分子网络和机制。深入探讨糖尿病肾病的发病机制,有助于寻找可靠的生物标记和治疗新靶点。长链非编码RNA(lncRNA)是长度大于200 bp的一类非编码蛋白的RNA,参与调节肿瘤、肾脏病等在内的多种疾病。LncRNA在糖尿病肾病中的作用逐渐凸显。越来越多的实验证据表明lncRNA可能作为竞争内源性RNA或者天然miRNA海绵。芯片分析表达谱显示lncRNA DLX6-AS1在糖尿病肾病病人中表达明显上调,miR-346表达下调。生物信息学表明lncRNA DLX6-AS1可能含有miR-346的结合位点。lncRNA–miRNA竞争性反应可能参与糖尿病肾病病生理事件的发生和发展。在这项研究中,我们将探讨lncRNA DLX6-AS1在糖尿病肾病中诱导足细胞损伤的作用,以及DLX6-AS1与尿白蛋白等临床指标的相关性。方法(1)人肾组织标本收集:肾活检确诊糖尿病肾病患者肾穿组织标本15例;肾肿瘤切除患者癌组织周围正常组织中,5例患有糖尿病且尿蛋白阴性患者作为糖尿病组,10例不患糖尿病的作为正常对照组。所有标本来源于郑州大学第一附属医院。(2)人血清标本收集:研究纳入97例血清标本,健康对照组32例,患有糖尿病伴或不伴有肾病患者65例,离心后分离血清用于后续研究。所有标本来源于郑州大学第一附属医院。(3)实时荧光定量PCR:实时荧光定量PCR检测lncRNA DLX6-AS1和miR-346表达。分别用GAPDH和U6作为内参。(4)荧光原位杂交(FISH):应用锁核酸(LNA)探针检测lncRNA DLX6-AS1在肾组织中的表达,并与足细胞标记蛋白podocin共染。(5)形态学分析:肾组织石蜡切片进行PAS染色,透射电镜测量基底膜厚度及足细胞足突损伤等。(6)数据分析:多组间差异比较采用卡方检验或者单因素方差分析。两组间比较正态分布数据采用t检验,非正态分布数据采用Mann–Whitney U检验。单因素相关分析采用Spearman相关系数。线性回归分析将尿白蛋白作为因变量,lncRNA DLX6-AS1相对表达水平作为自变量。结果(1)在肾组织中,相较于对照组,糖尿病肾病组lncRNA DLX6-AS1表达明显上调,而在糖尿病组表达降低,mi R-346在糖尿病组和糖尿病肾病组的表达明显下调。血清中分析结果与肾组织表达基本一致,血清中DLX6-AS1的表达随尿白蛋白的升高趋势愈加明显。(2)PAS染色和透射电镜等显示肾小球肥大、足突融合、基底膜增厚、系膜基质增多等。(3)在伴或不伴有肾病的糖尿病患者体内,lncRNA DLX6-AS1的相对表达水平与ACR(r_s=0.626,P<0.001)、eGFR(r_s=-0.289,P=0.020)等显著相关。(4)FISH结果显示糖尿病肾病患者肾小球中lncRNA DLX6-AS1表达明显升高,与podocin共染提示足细胞损伤的同时,DLX6-AS1在足细胞的表达有所增加。结论lncRNA DLX6-AS1在糖尿病肾病环境下表达上调,负调节miR-346的表达,与尿白蛋白成正相关。DLX6-AS1介导糖尿病肾病肾功能的下降,可能与足细胞损伤相关。通过研究这一新型RNA交互作用将会进一步了解糖尿病肾病调节机制,为诊断生物标记物的应用提供依据。