大豆疫霉生防菌的分离鉴定及生防作用研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:suguangli1507
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由大豆疫霉(Phytophthora sojae)引起大豆疫病是大豆上的毁灭性病害。生物防治是防治该病的有效安全途径之一。为给大豆疫病生物防治提供新的生防菌资源,并为生防制剂开发提供实验依据,本学位论文对大豆疫霉拮抗菌的分离、筛选、鉴定及生防作用进行了较为系统的研究,取得的主要结果如下。1.大豆疫病生防菌的分离、鉴定及生理生化测定从采自安徽省合肥市蜀山区大杨店大豆田土壤和安徽农业大学农翠园大豆田土壤中分离到4株对大豆疫霉具有抑制作用的拮抗细菌,其中2株对大豆疫霉具很强的拮抗作用。首先观察菌落形态及测定大豆疫病生防菌的生理生化性质,生防菌YG-2为革兰氏阴性、好氧型细菌,菌落边缘光滑平整。葡萄糖氧化发酵实验为氧化型,不能使明胶液化,可以分解过氧化氢,能使淀粉水解,不能水解纤维素,具有耐盐性,在含1%、2%和7%NaCl的LB培养液OD600值变化不大。可以在pH为5-10的环境生长,最适pH为7,可以在10-45℃生长,最适温度为37℃。够利用多种物质作为碳氮源。经16S r DNA序列比对,与序列号:CP019667.1的同源性为99%。据此,将生防菌YG-2初步鉴定为洋葱伯克氏菌(Burkholderia cenocepacia)。生防菌YG-4与芽孢杆菌接近,革兰氏阴性、好氧型细菌,葡萄糖氧化发酵实验为氧化型,能使明胶液化,可以分解过氧化氢,能使淀粉水解,不能水解纤维素,没有耐盐性,在含7%NaCl的LB培养液生长缓慢。可以在pH为5-10的环境生长,最适pH为7,可以在10-45℃生长,最适温度为37℃。生防菌YG-4能够利用多种碳氮源。经16S r DNA序列比对,序列号:JQ229807.1的同源性为99%。据此,将生防菌YG-4初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。2.生防菌YG-2和YG-4对大豆疫霉的抑制作用及YG-4抑菌图谱测定由于在实验的过程中发现用生防菌对不同地区的大豆疫霉抑制率有些区别,故使用生防菌株YG-2和YG-4对8株不同地区的大豆疫霉P6497,XX2,GZ6,GZ37,SX8,30,LB5-7,GY18-1进行抑制率测定。生防菌YG-2和YG-4对不同地区的大豆疫霉的抑制率有所差异,并且同一种生防菌对不同地区的大豆疫霉的抑制率也有所差异。生防菌YG-2和大豆疫霉SX8的抑制率最高达到78.31%(对峙培养第6 d),对GZ37的抑制率最低仅16.88%(对峙第6 d),对P6497的抑制率为59.52%,对XX2的抑制率为62.35%。测定了生防菌YG-4对链格孢(Alternaria Nees)、棉花红粉菌(Trichothecium roseum)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)、苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)等13种病原真菌的抑制率。结果表明,生防菌YG-4对不同病原真菌的抑制效果有很大的差距,对核盘菌抑制率为79.63%,小麦纹枯抑制率为74.07%;对链格孢、棉花红粉病菌、燕麦镰孢、番茄早疫病菌、玉米小斑病菌、烟草赤星病菌的抑制率从37.04%-55.56%不等;对西瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌抑制能力较弱,对小麦赤霉病菌、马铃薯晚疫病菌和苹果炭疽病菌的抑制率均在10%以下。3生防菌YG-2和YG-4对大豆疫病的防效实验YG-2发酵液对大豆疫病的离体叶片防效达78.57%;YG-4发酵液对大豆疫病的离体叶片防效达60.71%。生防菌YG-2发酵液菌液对大豆疫病的盆栽防效达60.67%,生防菌YG-4发酵液菌液对大豆疫病的盆栽防效达60.00%。洋葱伯克氏菌YG-2和解淀粉芽孢杆菌YG-4的发酵液能使大豆疫霉侵染大豆叶片的效果降低,而且生防菌YG-2的发酵液防治效果比YG-4发酵液的防治效果要强一些。生防菌发酵液经细菌过滤器过滤,说明生防菌YG-2和YG-4防治效果不是由于菌种之间活菌的竞争作用,而可能是发酵液中的某种产物引起的。关于生防菌YG-2和YG-4的生防作用机制尚需进一步研究探明。
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