【摘 要】
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骨软骨病(Osteochondrosis,OC)是一种对动物运动机能危害严重的疾病。骨软骨病的发病原因目前尚不明确,骨软骨缺血和II型胶原的作用可能是最有可能的病因。犬骨软骨是由软骨
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骨软骨病(Osteochondrosis,OC)是一种对动物运动机能危害严重的疾病。骨软骨病的发病原因目前尚不明确,骨软骨缺血和II型胶原的作用可能是最有可能的病因。犬骨软骨是由软骨细胞和ECM组成,ECM的主要成分是II型胶原和糖胺聚糖,基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)对Ⅱ型胶原三螺旋结构的裂解能力是最强的。MMP-13可能在犬骨软骨病发生发展中发挥重要作用,但目前没有用于犬MMP-13检测的单克隆抗体。本研究目的是为获得抗犬MMP-13单克隆抗体,研究犬骨软骨病相关MMP-13参与机制。本研究首先针对犬MMP-13基因的CDS区,采用原核表达系统成功诱导并纯化了MMP-13重组蛋白,免疫小鼠,经亚克隆筛选获得了10株能够稳定分泌抗犬MMP-13单克隆抗体杂交瘤细胞株,其抗体效价为1:819200,亚型为Ig G1。免疫组化染色结果显示MMP-13表达主要分布在靠近损伤处软骨的表层和中层软骨细胞细胞质及软骨陷窝区域。免疫印迹实验检测犬骨软骨病损伤模型显示MMP-13在第30d和60 d较假手术组有较显著的升高。本研究成功制备了MMP-13单克隆抗体并在犬骨软骨病模型中得到验证,并揭示了犬骨软骨病模型中MMP-13的分布和血清中相对含量的时程变化,为MMP-13参与犬骨软骨病的机制研究提供理论依据。
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