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背景急性心肌梗死在紧急开通血管恢复血流灌注的同时,其带来的缺血-再灌注损伤可导致恶性心律失常、心力衰竭等而增加死亡风险,使获益大大降低。因此,急性心肌梗死不仅仅要尽早恢复血流灌注,同时降低缺血-再灌注所带来的心肌损伤风险。PI3K/Akt是细胞内重要信号通路,激活PI3K/Akt信号通路可抗细胞凋亡坏死,减轻缺血再灌注损伤。研究发现microRNA与心血管疾病发生发展有密切联系,其中microRNA-499可能通过PI3K/Akt发挥心肌保护作用。目的1.研究miRNA-499低表达对心肌-缺血再灌注损伤的影响2.研究miRNA-499及PI3K/Akt信号通路对心肌-缺血再灌注损伤的调控作用方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组(AAV9-miR-499)、心肌缺血-再灌注组(MIRI+AAV9-miR-499)、PI3K抑制剂(LY294002)预处理后缺血-再灌注组(LY294002+MIRI+AAV9-miR-499)及阴性对照组(MIRI+AAV9)。首先,利用尾静脉注射将携带miRNA-499基因敲减序列的腺相关病毒9型(AAV9)注入小鼠体内构建miR-499基因敲减小鼠模型。其次,结扎小鼠冠状动脉30min,恢复血流灌注2h建立心肌缺血再灌注模型,其中假手术组仅穿线过前降支;PI3K抑制剂干预组于建立心肌缺血-再灌注模型前1h注射PI3K抑制剂LY294002。最后,在小鼠心肌缺血-再灌注末摘取小鼠心脏,利用RT-PCR检测miRNA-499表达量、Western Blot检测Akt及磷酸化Akt(P-Akt)表达量、TTC染色法测定心肌梗死面积,以研究心肌梗死面积、miR-499及Akt蛋白表达之间的相关性。结果1.各组miR-499表达量比较与对照组(1.50±048)相比,sham组miR-499表达量(0.61±0.26)减少(P<0.05);与对照组比较,miR-499敲减手术组的miR-499表达量(0.84±0.39)减少(P<0.05);LY294002干预组(0.69±0.19)与对照组相比miR-499表达也明显降低(P<0.05);同时sham组、miR-499基因敲减手术组及LY294002干预组之间miR-499基因表达量无统计学差异(P>0.05)2.各组Akt磷酸化活性的比较Akt蛋白磷酸化活性主要由P-Akt与Akt的比值来表示:与假手术组(0.36±0.35)相比,miR-499敲减手术组Akt磷酸化活性(0.17±0.29)明显降低(P<0.05);与假手术组比较,LY294002干预组Akt磷酸化活性(0.16±0.87)明显降低(P<0.05),而同miR-499敲减手术组相比,Akt磷酸化活性无统计学差异(P>0.05)3.各组心肌梗死面积的比较与miR-499基因敲减手术组(12.43±1.77)%相比,对照组心肌梗死面积(8.47±1.67)%减少(P<0.05);同假手术组(0±0.00)%相比,miR-499基因敲减手术组心肌梗死面积明显增加(P<0.05):但与LY294002干预组(18.67±5.09)%相比心肌梗死面积减小(P<0.05)结论MiRNA-499低表达及PI3K/Akt活性下调加重心肌缺血-再灌注损伤