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第一部分:Galanin及其受体在人嗜铬细胞瘤中的表达及其意义【目的】本部分通过159例人嗜铬细胞瘤临床资料分析,研究功能不同嗜铬细胞瘤的特点和血清galanin的差异及galanin与受体在嗜铬细胞瘤组织中表达的差异。【方法】分析功能不同嗜铬细胞瘤患者临床特点的差异,Elisa法检测血清galanin差异,用免疫组织化学法检测石蜡组织切片中galanin及其受体的表达差异。【结果】功能隐匿嗜铬细胞瘤在年龄、性别、良恶性、肾上腺内外分布上与功能性者无统计学差异,在尿24小时儿茶酚胺等有统计学差异。血清galanin水平上功能隐匿组(1.92±0.86)ng/ml[正常值:＜3.5ng/ml],功能组(1.87±0.84)ng/ml与正常健康人和高血压患者组无统计学差异。石蜡组织切片中galanin在功能隐匿组的阳性表达6例(23.1%)低于功能组123例(94.6%);受体GALR1的阳性表达在功能隐匿组25例(96.2%)与功能组124例(95.4%)无差异;GALR2的阳性表达在功能隐匿组9例(34.6%)低于功能组113例(86.9%)。【结论】嗜铬细胞瘤中分泌儿茶酚胺功能与患者血清galanin水平不相关,而可能与肿瘤组织中的galanin水平及受体GALR2的表达有关。第二部分:人嗜铬细胞瘤细胞的原代培养及鉴定【目的】建立人的嗜铬细胞瘤细胞的原代培养方法。【方法】采用连续分次胶原酶消化法分离培养人原代嗜铬细胞瘤细胞,采用细胞培养基中儿茶酚胺水平检测及细胞嗜铬粒蛋白A(CgA)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的免疫组化染色等方法进行细胞性质和功能鉴定,并用噻唑兰(MTT)法观察原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞的生长曲线。【结果】成功建立了人嗜铬细胞瘤细胞的原代培养方法。人嗜铬细胞瘤细胞在培养3-7天时生长较快,3-5天后细胞开始分化。经检测细胞培养基中的儿茶酚胺浓度,CgA和NSE的免疫组化阳性染色等,证明该细胞有合成和分泌儿茶酚胺的功能。初步分离后的细胞直径差别较大,可明显的分为大小两类细胞。大细胞表达CgA、galanin弱,NSE、GALR1、GALR2的表达差异则不明显。【结论】原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞具有生长和嗜铬细胞瘤的分泌和表达功能,可为该肿瘤的体外实验研究提供基本的材料及研究手段。临床上功能隐匿的嗜铬细胞瘤细胞体外培养与有功能者的分泌儿茶酚胺的能力差异不大,体内可能存在其他影响分泌的因素。第三部分Galanin、糖皮质激素等刺激物对原代培养人嗜铬细胞瘤细胞儿茶酚胺分泌功能的影响【目的】通过采用galanin及其他刺激物对原代培养嗜铬细胞的实验研究,探讨糖皮质激素、galanin等对于嗜铬细胞瘤细胞分泌儿茶酚胺功能的影响及可能的作用机制。【方法】采用第二部分培养的人原代嗜铬细胞瘤细胞,用不同浓度地塞米松、galanin、TGF、U0126(ERK激酶抑制剂)、GF109203X(PKC激酶抑制剂)作用后检测细胞培养基中儿茶酚胺水平及galanin、GALR1和GALR2的免疫组化染色等方法进行细胞功能鉴定,并用噻唑兰(MTT)法观察嗜铬细胞瘤细胞的生长曲线变化。【结果】地塞米松可导致原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞儿茶酚胺分泌显著增加,而且其增加是与剂量相关的,去甲肾上腺素增加2-3倍,肾上腺素增加2-3倍,而对增殖没有影响。galanin可导致原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞儿茶酚胺分泌增加,去甲肾上腺素增加1-2倍,肾上腺素增加1-2倍,较地塞米松作用弱,同时有增强细胞增殖的作用。这种作用可以被U0126或GF109203X阻断。TGF增强细胞增殖但抑制儿茶酚胺分泌。【结论】人嗜铬细胞瘤细胞分泌儿茶酚胺功能与地塞米松、galanin水平相关,地塞米松、galanin可以刺激原代培养人嗜铬细胞瘤细胞合成、分泌儿茶酚胺,地塞米松不增强嗜铬细胞瘤细胞增殖,galanin可能通过ERK或PKC激酶途径机制参与细胞生长和儿茶酚胺分泌与释放。受体GALR2可能是galanin上述生理作用机制的主要介导途径。Galanin及受体GALR2缺乏可能是嗜铬细胞瘤功能隐匿的主要原因。