论文部分内容阅读
7-乙基-10-羟基喜树碱(7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin, SN38)是植物抗癌药物喜树碱(camptothecin, CPT)的一种衍生物,具有广谱的体外抗肿瘤活性。然而,SN38在大部分生物相容和药剂学上可接受的溶剂中都难溶解,不能直接应用于临床的治疗。为了提高SN38的溶解度,探索潜在应用,本论文构建了一种两亲性SN38磷脂偶联物,对其合成路线、理化性质及体外抗肿瘤活性进行初步研究,具体内容如下：(1)SN38与甘油磷酰胆碱(L-a-Glycerophosphorylcholine, GPC)通过丁二酸酐连接得到7-乙基-10-羟基喜树碱-磷脂偶联物(Dual 7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin-tailed glycerylphosphorylcholine conjugate, Di-SN38-GC);利用HPLC、 MS、 NMR等表征手段检测中间体7-乙基-10-羟基喜树碱半琥珀酸酯(7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin-20-O-hemisuccinate,20-O-SN38)和目标产物Di-SN38-GC的纯度和结构信息；考察了不同酯化体系、投料比、温度和时间对获得目标产物反应的影响,得出最优化的反应条件。结果显示：中间体20-O-SN38及目标产物Di-SN38-GC的纯度分别为98.62%和98.76%;MS和NMR指示的分子结构信息与理论相符；在以CDI/DBU为催化体系,反应时间2h,反应温度35℃、投料比n20-O-SN38:nCDI:nGPC:nDBU=1:1.5:0.4:1(摩尔比)的条件下合成Di-SN38-GC的收率最高,为9.7%。(2)利用薄膜分散法制备Di-SN38-GC脂质体；通过标准曲线法测定了Di-SN38-GC在室温下的平衡溶解度；通过电导率法研究Di-SN38-GC偶联物的临界聚集浓度(CAC)；以动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)确定Di-SN38-GC脂质体的粒径分布Zeta电位和微观形貌。结果显示：Di-SN38-GC在纯水中的溶解度为426 μg/mL,远高于原药SN38的溶解度(7 μg/mL),一定程度克服了原药水溶性差的缺点；两亲性Di-SN38-GC偶联物在水体系中具有自组装能力,其CAC为53 μg/mL;该偶联物脂质体粒径分布较窄,平均直径为159 nm, Zeta电位为-21.6 mV,推测具有良好的稳定性；冷冻透射电镜显示,脂质体具有双分子层结构,符合一般脂质体的结构特征。(3)利用细胞毒性实验(MTT)评估Di-SN38-GC偶联物的体外抗肿瘤活性。结果显示,Di-SN38-GC对HepG-2细胞、 HeLa细胞和HT-29细胞的IC50分别为35 μg/mL、 17 μg/mL、 26 μg/mL,均表现了其良好的抗肿瘤活性。表明磷脂修饰对SN38的抗肿瘤活性无明显影响。(4)利用多肽固相合成法(SPPS)合成20肽抗凝血药物比伐卢定；考察合成过程中不同保护氨基酸耦合的条件。结果显示,比伐卢定的前端十肽及最终产物的分子离子峰符合预期。综上,本文构建成功SN-38磷脂偶联物,具有组装形成脂质体纳米微球的能力,因而具有潜在的应用价值。