背景与目的化疗是目前临床治疗恶性肿瘤的主要手段之一,由于化疗药物的选择性低,故其在抑制或杀灭肿瘤细胞的同时必然会损伤正常细胞,对人体正常细胞特别是增殖旺盛的细胞同样具有强大的杀伤作用。所以,在临床中应用抗肿瘤药物化疗后最常见而且比较严重的不良反应是骨髓抑制,从而引起白细胞减少甚至全血细胞减少；其危害首先累及粒细胞系,其次为血小板、红细胞；此外,细胞及体液免疫功能,生理防御屏障功能均可受到累及。严重时影响化疗的正常进行而不得不推迟用药、减量或停药,导致化疗失败。因此从某种意义上来说,如何减轻化疗后骨髓抑制是化疗成功与否的关键所在。寻找能够防治骨髓抑制的药物和方法显得极为重要。目前,在防治化疗过程中所致骨髓抑制的方法有：口服升白药,如鲨肝醇、利血生、维生素B4之类,但是其升白作用较差；再者就是输注成分血或进行造血干细胞移植,但这两种方法治疗重复性差且不能广泛使用。当前新型的升白药物有：基因重组人红细胞生成素、白细胞介素-11、基因重组人粒细胞集落刺激因子、血小板生成素、基因重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子等。这些药物疗效有限,而且价格昂贵。因此,寻找具有骨髓保护、减轻化疗药物毒性、提高患者生存质量的药物具有非常重要的意义。“唐草片”是首个国家食品药品监督管理局批准用于治疗艾滋病的纯中药新药。中药唐草片的组成成分多,包括石榴皮、金银花、糯稻根、瓜蒌皮、柴全蝎等二十多味中药。因其各成分所包含的化合物种类结构多样性,产生作用的靶点非常多。现代药理研究和临床研究表明唐草片具有明确的抑制HIV病毒复制、修复损伤的免疫细胞、提高机体免疫功能、抗氧化清除自由基、延缓艾滋病的进程、保护肝脏、防御患者的机会性感染、升高CD4+T淋巴细胞等作用。唐草片升高CD4+T淋巴细胞的作用是减少CD4+T细胞的破坏,还是促进再生或两者兼而有之,其机制目前并不清楚,但提示其有促进白细胞恢复的作用。如果唐草片具有升高白细胞的作用,可以对抗其他药物治疗方案的不良反应,提高治疗的综合疗效,增加唐草片的适应症,扩大应用范围,充分显示中药的治疗优势。因此唐草片是否具有促进造血细胞再生或保护骨髓造血功能的作用,非常值得探讨。方法1.升高白细胞实验分组和剂量：昆明种健康小鼠根据体重随机分为6组,每组10只。分为正常对照组、模型组、阳性药对照组、模型+唐草片低剂量组、模型+唐草片中剂量组、模型+唐草片高剂量组,唐草片低、中、高剂量依次为0.5g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg体重,唐草片用药灌胃5天后,小鼠腹腔注射丝裂霉素3mg/kg一次,五天后再注射丝裂霉素2mg/kg一次。唐草片连续灌服21天,正常对照组、模型组灌服等量生理盐水,阳性药对照组在模型成功后皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子50μ/kg,不同时间取尾静脉血测定血细胞数,直到模型组动物白细胞升高至或接近正常水平。分别在给药前和给药后不同时间称量动物体重；2.骨髓细胞集落培养和计数：在实验结束时用安死术处死小鼠,无菌取一侧股骨骨髓细胞,严格按照说明书操作,培养14天后分别计数红细胞爆式集落生成单位(CFU-E)、粒细胞-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)、粒细胞-红细胞-巨噬细胞-巨核细胞集落生成单位(CFU-GEMM)数量等。取另一侧股骨,按常规冲出骨髓细胞,计数有核细胞数。3.荷瘤动物实验分组和剂量：动物根据体重随机分为5组,每组6只。分为正常对照组、荷瘤动物组、荷瘤动物+唐草片(1.0g/kg体重)中剂量组、荷瘤动物+唐草片(1.0g/kg体重)中剂量组+丝裂霉素(5.0mg/kg体重)组、荷瘤动物+丝裂霉素(5.0mg/kg体重)组。预防应用唐草片5天,分别给小鼠皮下和腹腔接种鼠S180肉瘤细胞(107/只),接种瘤细胞第二天应用化疗药物丝裂霉素5.0mg/kg治疗一次。唐草片连续给药共18天。皮下接种瘤细胞的动物唐草片连续给药共18天后,动物称重、取尾静脉血后处死,剖取瘤体、胸腺、脾脏称重,计算抑瘤率和胸腺指数、脾脏指数。腹腔接种瘤体的动物唐草片连续给药共18天后,动物称重、取尾静脉血测定外周血细胞数等变化,继续观察动物的死亡情况。4.实验数据以均数士标准差(X±s)表示,应用SPSS10.0分析软件对实验数据进行统计分析,采用多个样本均数比较的单因素方差分析法进行统计分析,取P＜0.05为显著性检验水准。结果1.外周血白细胞数的变化：第一次注射丝裂霉素后18天(模型建成第八天),各组白细胞数有所回升,但明显低于对照组；第24天时,唐草片中、低剂量组和阳性对照组白细胞数明显高于模型对照组(p＜0.05),达到正常对照组水平；第33天时治疗组仍然维持在较高的正常对照组水平,模型对照组还低于正常水平(p＜0.05)。第40天时,唐草片中剂量组、阳性对照组的白细胞已经开始下降,唐草片低剂量组仍然维持在较高的水平。第47天时模型对照组白细胞才恢复到正常水平,唐草片治疗组白细胞数的恢复比模型对照组提前23天恢复至正常水平。2.中性粒细胞和淋巴细胞数的变化：中性粒细胞和淋巴细胞数的变化趋势和外周血白细胞数的变化趋势大体一致。3.外周血红细胞数的变化：在化疗后的前24天,各用药组红细胞数升高并不明显,甚至低于正常对照组水平,但第33天以后,低剂量唐草片组红细胞数高于模型组,一直持续到实验结束,结果提示唐草片有促进红细胞数恢复的作用。4.骨髓细胞数和骨髓细胞培养后集落数的变化：各组骨髓有核细胞数差别不大,只有唐草片低剂量组较低,为每根3.0×1010个,其他组在每根5.5×1011～6.5×1011个之间。唐草片低剂量组红系、粒单核系集落细胞数和中剂量组CFU-GEMM集落数高于模型对照组(p＜0.05),提示唐草片促进造血功能的恢复,可能和它促进造血干/祖细胞增殖分化作用有关。5.动物体重的变化：动物体重在化疗后10天,普遍低于正常对照组,但和化疗之前比较并没有明显降低。整个实验过程中动物体重有逐渐增加的趋势。6.唐草片对丝裂霉素抗肿瘤作用的影响：皮下接种瘤细胞的荷瘤组,瘤体膨大,中间有水样液体,丝裂霉素组以及唐草片和丝裂霉素联合组瘤体小,中间无水样液体。唐草片、丝裂霉素单独作用对S180肉瘤的抑制作用不明显,但联合两者在动物体内抑制率达43.3%。对接种的腹水瘤的动物,荷瘤对照组动物43天已全部死亡,丝裂霉素单独治疗组中一只动物出现腹水并死亡,丝裂霉素和唐草片联合组动物全部存活,虽未见唐草片的增强作用,但也未见拮抗作用。7.唐草片对荷瘤动物血细胞数的影响：实体瘤小鼠外周血中多种血细胞数唐草片和丝裂霉素联合组低于其他组,原因不明。而腹水瘤小鼠外周血中红细胞数高于单用丝裂霉素组(p＜0.05)。结论1、本研究用丝裂霉素建立了稳定的小鼠白细胞降低模型；2、唐草片可以促进注射丝裂霉素小鼠白细胞的恢复；3、唐草片在荷瘤动物接受化疗药物丝裂霉素治疗过程中,不会拮抗丝裂霉素的抗肿瘤作用。