论文部分内容阅读
生物方剂分析中医药学研究设想黄熙在长期“证治药动学”研究的基础上提出的。主要是指在方剂吸收入生物体内化学成分分析的指导下，进行方剂在体/离体药效学实验、方剂药动学实验、方剂质量控制标准、中药植物化学、中药制剂学和证本质等方面的研究。生物方剂分析药理学是这个设想的重要组成部分，包括生物方剂分析药动学和药效学两个部分，它是指以中医药基本理论为指导，在方剂吸收入生物体内化学成分分析指导下探索方剂体内化学成分的动态变化规律(药动学)，定性定量地研究上述成分对机体的作用规律，及其对生物机体的生理/化指标、病理生理指标的影响(药效学)，从而阐明方剂的药效物质基础(药动-药效关系)。本实验研究主要涉及生物方剂分析药动学部分，以大川芎丸标准提取物为研究对象，根据文献报道的药理效应，选择其中的两个活性化学成分：川芎中的阿魏酸和天麻中的天麻素进行其在动物体内的药动学研究，探索其作用规律，为进一步确定大川芎方的体内药效物质基础打下基础。如果上述成分吸收入体内且能诱导发挥母方疗效，则这些成分很可能是该方剂中的有效成分之 第四军医大学硕士学位论文一，即它的体内药效物质基础。如果将这些成分作为方剂的质量控制标准，对改进中药复方的剂型及增强疗效、减轻毒副作用都将大有稗益。 目的： 建立大）I博丸方中）I！草的化学成分阿魏酸（FA）在健康家兔血清”’和天麻的化学成分天麻素（Gas）在健康大鼠血浆中’‘’的反相高效液相色谱 （y．HPLC）测定方法，采用血药浓度法进行二者在动物体内药代动力学研究，并通过液－质联用（LC－MS）对大）I！竿方的体内外成分谱进行初步的分析。 方法： 1．家兔服用大）1博方后体内阿魏酸方法学的改进及药动学研究：大）I博丸浸膏给家兔灌胃后，不同时间点取血，分离血清，血清样品预处理方法根据文献资料方法加以改进”’，应用沸水浴一次处理，甲醇二次处理后氮气流（NZ）吹干，再用甲醇复溶去除蛋白质方法，用RP－HPLC直接测定健康家兔服用大）I丸后体内的 FA含量。FA用内标（香豆精）法定量。大）11芍丸家兔灌胃量为人临床用药量的 2 0倍，灌胃前禁食不禁水 24h。所得数据以3P97药动学软件进行药动学拟合分析，得到药动学参数，观察药动学特点，分析FA在家兔体内经时变化过程。 色谱条件：①、Inertsil ODS－3（5 p m）色谱柱（4＊ x 250 Inln）为固定寸；流动相为甲醇：水：冰乙酸（49：50．745：0．255，v／v，欣 l．0二，检测波长 322 urn。①、Hypersil ODS（5 u m）色谱柱 （．6 x 10 mm）为固定才，流动相为甲醇：水：冰乙酸（40：59．7：0．3，v／v），流速 1刀 nUmill，检测波长322 nmo 2．大鼠服用大）Ilg丸后天麻素体内方法学的建立及药动学研究：大）11穹丸浸膏给大鼠灌胃后，不同时间点取血，分离血浆，应用无水乙醇沉淀一次处理、氮气流（N。）吹千后，再以水复溶，用RP－HPLC直接测定健康大鼠 6 第四军医大学硕士学位论文服用大）l！穹方标准提取物后血浆中天麻素（Gas）的含量，Gas用内标（间苯三酚）法定量，大刀！穹丸浸膏大鼠灌胃量为人临床用药量的Zo倍，灌胃前禁食不禁水24 h。所得数据以 3P97药动学软件进行药动学拟合分析，得到药动学参数，观察药动学特点，分析天麻素（Gas）在大鼠体内经时变化过程。 色谱条件：Diarnonsil厂M）钻石（C18 5 P m）色谱柱（4．6 x 150 nun）为固定相，流动相为乙睛：水：磷酸门石4：97．36：0．2，v／v），流速 1刀 ml／min，检测波长 22 urn。 3．液－质联用（LC－MS）分析大）l！穹方体内外成分谱：通过LC．MS分析大）［博方标准提取物体外及进入体内的咸分谱，寻找大）I博方治疗偏头痛的物质基础。 ＠ 家兔服用大）IIg方标准提取物前后 LC－MS分析： 色谱条件：固定相：HypersilODS归）色谱柱O石x 100nunX流动相：甲醇：水：冰乙酸（40：59．7：0．3，V／v）；流速（F）：l刀 Vlimill；检测波长（人）：322 urn；毛细管温度：250oC；喷雾电压：4 KV；壳气：60 rb；辅助气：20rb； ③大鼠服用大刀！穹方标准提取物前后LC－MS分析： 色谱条件：固定相：Diamonsil（CI urn）色谱柱（．6x 150。）；jk动相：乙睛：水门石4：97．36，v／v）；流速（F）：l刀 mUmin；检测波长（A）：221 urn；毛细管温度：250’C；喷雾电压：4 KV；壳气：60 rb；辅助气：20arb 结果： ①FA的最低检测限为 0．25 ng，样品预处理后最低血清检测浓度为 5 ng／PI，线性范围是 26．4－4224 ng，r－0．9999。健康家兔员用大刀 丸标准提取物后5分钟体内即可测出趴，在15分钟达高峰。平均加样。收率93．59％， 7 第四军?