水稻灌浆期耐热性关键候选基因的筛选及CRISPR载体构建

来源 :江西农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:libingyao2009
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
全球气候变暖、夏季频繁出现的高温天气(尤其是夜间高温)造成水稻减产和稻米品质下降,威胁我国粮食安全,因而探究水稻耐热的分子机理、选育耐热水稻优良品种刻不容缓。本研究应用RNA-Seq和全长转录本PacBio测序,从基因转录水平上分析了水稻应答灌浆期夜间高温的基因表达模式;利用iTRAQ蛋白标记技术和液相质谱鉴定技术,从蛋白质组水平上鉴定了水稻应答灌浆期夜间高温的差异表达蛋白;进而通过基因在转录水平和蛋白质水平的表达模式联合分析,确定了与信号传导相关基因Os05g0585500(LOCOs05g50810)是参与调控水稻灌浆期耐夜间高温的关键候选基因。进一步对这一关键候选基因进行序列比对、靶位点设计,构建了携带LOCOs05g50810基因靶位点的特异性CRISPR/Cas9表达载体。取得的主要研究结果如下:(1)RNA-seq分析和PacBio的全长转录本测序获得26,327个全长转录本的序列及它们的表达模式,利用iTRAQ蛋白标记技术和液相质谱鉴定技术鉴定了3,130个蛋白质及其表达丰度。表达模式分析显示,耐热纯系和热敏感纯系之间存在差异表达倍数大于1.5倍的转录本有10,996个,耐热纯系和热敏感纯系间存在差异表达倍数大于1.5倍的蛋白质有70个。(2)源于蛋白质组分析结果的上述70个差异表达基因的功能主要涉及光合作用、生物合成、转录调控、防御反应、逆境应答、能量代谢、物质转运、氧化还原、信号传导。进一步通过基因在转录水平和蛋白质水平的表达模式的联合分析,发现了一个钙依赖的信号传导蛋白基因LOCOs05g50810,该基因在耐热纯系和热敏感纯系间的(mRNA)差异表达倍数仅0.97倍,而其编码蛋白的差异表达倍数达1.93倍,表明转录组中微小的变化导致蛋白质组显著变化。在钙依赖的信号传导蛋白中,该基因编码蛋白在耐热纯系和热敏感纯系间的差异表达水平最高,结合前人研究结果,故而确定参与Ca2+依赖的信号传导的基因LOCOs05g50810为调控水稻灌浆期耐夜间高温的关键候选基因。(3)根据测序获得的全长转录本序列及其数据库比对结果,设计基因靶位点,构建了携带LOCOs05g50810基因靶位点的特异性CRISPR/Cas9表达载体,为继续进行遗传转化、打靶效率检测、候选基因的生物学功能验证奠定了研究基础。
其他文献
列车脱轨是影响铁路安全运营的一个重要因素,自铁路诞生以来,就一直是学术界的一个热门课题。引起列车脱轨的原因主要是轨道不平顺性发生改变,即超过了列车脱轨的不平顺限值
银(Ag)纳米颗粒及银合金薄膜因具有显著的表面等离子体共振特性,已成为制备表面增强拉曼散射(Surface Enhanced Raman Scattering,SERS)基底的首选材料,广泛应用到生物医学、食品安全、环境监测、材料科学等领域。如何制备出性能良好、结构均匀且价格合适的基底是SERS技术领域最为关键的研究课题之一。论文采用磁控溅射方法在三种基体上制备了Ag颗粒/Ag-Zr合金膜复合结构
近年来建筑学和结构学的隔阂渐深,又逢建筑行业解构主义盛行,诸多建筑都在设计出形式新奇的建筑形态后再设计建筑结构支撑起形态,结构本身具有的形态意义被忽视。同时随着全
本文主要是以西安市不同功能区作为研究区域,分别对采暖期和非采暖期,深度为(0-20cm)和深度为(20-50cm)土壤中持久性有机污染物多环芳烃(PAHs)和黑碳的含量进行测定,分析西安
目的:探讨支气管扩张症急性加重期患者的中医体质分布特点,研究支气管扩张症中医体质与影响支气管扩张症严重程度的临床指标的关系,为临床运用中医理论治疗支气管扩张症提供新的思路。方法:采用临床流行病学调查方法,收集2019年1月至2020年1月于广东省中医院芳村医院呼吸内科住院的125例支气管扩张症急性加重期患者,收集患者的一般资料及与其严重程度相关的临床资料,对125例患者进行体质问卷调查并根据《中医
二化螟Chilo suppressalis和稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis是亚洲地区最重要的两种水稻害虫,对我国及东南亚地区的水稻生产造成严重的经济损失。长期以来,对二化螟和稻
随着市场经济的蓬勃发展,维修服务采购是企业实际生产运营的重要环节。目前,国内外学者对企业维修服务采购的关注较少,研究文献不多,缺少相对成熟及实用性强的维修服务供应商的相关评价体系。基于对G公司当前的维修服务供应商评价指标的分析来看,该指标体系并不健全和成熟,部分指标难以量化,过于单一,且存在评价指标范围过于宽泛等不足。另外,评价过程中不同部门专家意见主观性强,且没有清晰的权重算法,所选择的指标体系
文本情感分类是自然语言处理领域的一个子任务,随着用户生成内容的爆发性增长,已经成为当前研究的一个热点。用户生成内容增长的不仅是数据的规模,其涉及的领域也越来越广,受制于分类器的泛化能力,单领域的情感分类器已经不能满足现在的需求,多领域情感分类成为文本情感分析的突破方向。文本的特征化表示是文本情感分类过程中的一个重要步骤,Word2Vec模型是目前使用最广泛的文本特征化表示方法。Word2Vec模型
杂交水稻新品种育种的关键是不育系和恢复系选育。为选育适合生产的优良籼型三系不育系,本研究用大穗型保持系南大特B与中9B杂交、自交获得的F6经60Co诱变后,选育优良诱变株
表情是人类日常交流中传达情感的重要方式,可以直观地反映人类的心理状态,因此表情识别一直是人工智能方面,国内外的热门研究课题。随着计算机技术和面部表情识别算法的不断发展,计算机能够通过分析人类表情获取人类情感信息,从而对人类的状态以及意图等信息做出判断,这在人机交互、智能医疗、监控监测系统等领域,具有重要作用和意义。卷积神经网络是人工智能研究的一个新领域。卷积神经网络的发展极大地促进了面部表情识别技