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目的:⑴研究涎腺腺样囊性癌中Id-1的表达,并比较其和临床病理间的联系。⑵构建慢病毒载体基础上的Id-1RNA干扰系统,研究RNA干扰Id-1表达对涎腺腺样囊性癌的增殖、侵袭和转移的影响。
方法:①采用免疫组化技术、real-time PCR技术以及western blot技术研究涎腺腺样囊性癌石蜡标本和ACC-M和ACC-2细胞系中Id-1的表达,并比较其和临床病理间的联系。②通过RNA干扰技术,建立慢病毒载体基础上的Id-1RNA干扰稳定转染的ACC-M细胞株。③采用MTT、流式细胞仪、克隆形成实验和动物试验研究Id-1RNA干扰对涎腺腺样囊性癌增殖的影响。④采用Transwell侵袭实验和动物实验研究Id-1RNA干扰对涎腺腺样囊性癌侵袭和转移的影响。
结果:⑴Id-1表达在涎腺腺样囊性癌转移组和无转移组之间差异具有显著性(P<0.05);Id-1表达在涎腺腺样囊性癌临床I-II期和III-IV期之间差异具有显著性(P<0.05)。ACC-M细胞中Id-1基因和蛋白水平高于ACC-2细胞的表达。⑵限制性内切酶酶切和DNA序列测定Id-1表达载体证实,目的片段己正确插入载体且插入片段序列正确。实验证实慢病毒滴度达到107 TU/ml该病毒感染ACC-M细胞经筛选获得稳定转染细胞株,经real time PCR和Western blot分析表明,Id-1mRNA和蛋白表达水平出现了明显的敲减效应。⑶Id-1 RNA干扰后,对ACC-M细胞增殖能力无明显影响。⑷Id-1RNA干扰体外侵袭抑制率为34.12%,体内肺转移抑制率为77.64%。
结论:①Id-1的表达与涎腺腺样囊性癌的临床分期与转移密切相关。②慢病毒携带Id-1RNA干扰在体外可降低ACC-M的侵袭能力,在裸鼠体内能够抑制腺样囊性癌肺转移。③慢病毒是携带Id-1干扰RNA进入ACC-M的理想载体之一。