中国野生葡萄病程相关蛋白PR10.1抗霜霉病分子机理研究

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yczhudong
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
葡萄是世界上最古老、栽培范围最广的果树之一。基于其良好的品质和巨大的栽培面积,欧洲葡萄(Vitis vinifera)在葡萄产业上占据优势地位,也创造着可观的经济效益,另一方面,欧洲葡萄绝大多数属于感病品种,尤其容易感染真菌病害而导致严重经济损失。作为世界上葡萄的起源中心之一,我国拥有大量宝贵的野生抗病葡萄种质资源。本研究以高抗病的中国野生华东葡萄‘白河-35-1’为材料获得了华东葡萄病程相关蛋白PR10.1(Pathogenesis related protein 10)基因VpPR10.1,通过分析其基因结构,对其互作蛋白的筛选及调控葡萄对霜霉菌抗性的功能进行了研究,取得的主要研究结果如下:  1.中国野生华东葡萄病程相关蛋白VpPR10.1包含有PR10家族保守的P-loop和Bet VΙ两个功能结构域,与欧洲葡萄VvPR10.1氨基酸序列一致性为96.2%。通过基因枪介导的洋葱表皮瞬时转化和PEG介导的本氏烟草原生质体转化实验表明VpPR10.1主要定位于细胞质。  2.以 VpPR10.1 为诱饵蛋白从霜霉菌诱导的中国野生复叶葡萄?留坝-8?酵母双杂交cDNA文库中筛选得到了VpPR10.1的互作蛋白VpVDAC3(Voltage-dependent Anion Channel),经过酵母双杂交回复验证,双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC)、MBP Pull-down实验、免疫共沉淀(CoIP)共同验证了VpPR10.1与VpVDAC3的互作关系。通过PEG4000介导的本氏烟草原生质体瞬时转化体系证实了VpVDAC3定位于线粒体,VpPR10.1与VpVDAC3共定位实验说明二者在线粒体存在共表达。通过农杆菌介导的本氏烟草瞬时转化系统验证了VpVDAC3的过表达能够引起本氏烟草细胞死亡,DCFH-DA染色表明ROS介导了VpVDAC3引起的烟草细胞死亡证明了造成烟草细胞凋亡的原因与ROS的积累和Metacaspase表达有关,而VpPR10.1的存在加剧了这一过程。  3.将VpPR10.1在感病葡萄无核白(Vitis viniferaL.c.v?Thompson Seedless?)中过表达,通过接种霜霉菌发现转基因葡萄中VpPR10.1与VpVDAC3都响应了葡萄霜霉菌的侵染而表达量上调,对接种霜霉菌的转基因株系进行扫描电镜检测发现接种于转基因株系的霜霉菌的侵染受到了抑制,所接种的霜霉菌吸器数量、产孢量均减少;组织化学染色结果显示转基因株系会在病原菌侵染部位产生 ROS和胼胝质的累积,同时检测到细胞色素C的释放与葡萄中Metacaspase表达,最终引起霜霉菌侵染部位的细胞凋亡,限制活体专性寄生葡萄霜霉菌的定殖。这些结果表明 VpPR10.1 增强了寄主对葡萄霜霉菌的抗性。  4.在本氏烟草中过表达葡萄 VvMetacaspase4、VvMetacaspase5、VvMetacaspase6 基因,通过DAB染色与Typan Blue染色证实了葡萄Metacaspase过表达能够引起ROS的积累和细胞凋亡。将VpVDAC3转入拟南芥中,增强了对丁香假单胞菌pst DC3000的抗性。
其他文献
Yttrium iron gaet powder samples (Y3?xDyxFe5O12), where part of yttrium ions are substituted by dysprosium ions with different concentrations are prepared by th
小麦新种质龙88-10881随着小麦育种水平的不断提高,已有的小麦种质资源不能满足育种的要求,必须创造育种所需的新种质资源。利用远缘杂交是实现这一目的重要手段。龙88-10881就是通过两个属间杂
随着人类活动造成土壤中硒元素不断积累,硒元素逐渐成为一种潜在的环境危险元素,对植物正常生长造成毒害作用。为了研究不结球白菜硒毒害机理,本文结合药剂学实验和荧光探针
建设两个文明的宣传,应密切注视观念的更新,准确把握新闻的主题思想,展示出鲜明的现代意识。让我们看几个例子。“在有关‘两个文明’建设的宣传教育中,为了证明社会主义制
通过对21个表层沉积物样品中的Cu、Pb、Zn、Cd、Cr、Hg、As等7种重金属元素含量进行测定,分析了安铺港沉积物中重金属的空间分布特征及其对港湾生态环境的危害状况。采用重金
有线电视的兴起和发展,给无线电视带来了冲击和压力,这是客观存在,问题是如何看待这股冲击和压力。本文主要以沙市有线电视兴起与发展和无线电视的应变与自强为据,就正确处
一、11月1日,中共中央政治局常委、国务院副总理黄菊同志考察我所,并在我所主持召开了资本市场改革发展座谈会在资本市场改革发展座谈会上,黄菊听取了我所和上海证券交易所等
河北省沧州日报记者邓金艳采写的《她在台历上过日子》(载1989年12月1日沧州日报),大多采用镜头式和对话记叙的写法,可读可信,极为感人。作者四次深入现场采访,直至看见主人
Hyperthermia has proven to be beneficial to treating superficial malignancies,particularly chest wall recurrences of breast cancer.During hyperthermia,monitorin