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国内外已有很多研究报道,证实茶多糖具有显著的降血糖功能,但关于茶多糖化学修饰的研究还未见报道。本论文以中性茶多糖为原料,对其进行化学修饰,以制备高活性的降血糖多糖衍生物。
采用吡啶磺酸法合成硫酸酯化茶多糖,茶多糖与Fe3+、Ca2+溶液反应制备茶多糖的金属络合物。动物实验表明,茶多糖经硫酸酯化以后降血糖活性显著提高(P<0.01);TPS-Fe的降血糖活性显著提高(P<0.05),而TPS-Ca降血糖活性变化不显著,这可能与茶多糖空间结构改变有关。
对茶多糖硫酸酯化研究表明,酯化试剂比例、反应温度和反应时间是影响茶多糖硫酸酯化修饰的重要因素,得到的最佳工艺条件是:酯化试剂比例为1:3,反应温度为60℃,反应时间为4h,产物的取代度和得率可分别达到1.93、77.61%。
茶多糖在硫酸酯化过程中有部分降解。硫酸酯化茶多糖经DEAE-SepharoseFF分离,当取代度为1.43时得到三个级分:S-TPS-O(DS为0)、S-TPS-A(DS为0.97)、S-TPS-B(DS为1.54);取代度为1.93时得到三个级分:S-TPS-C(DS为0.91)、S-TPS-D(DS为1.51)、S-TPS-E(DS为2.13)。经高效凝胶色谱SephacrylS-300HR层析,琼脂糖凝胶电泳分析表明:S-TPS-B、S-TPS-E2、S-TPS-E1、S-TPS-C2、S-TPS-Cl都是均一多糖。
对比分析茶多糖及硫酸酯化茶多糖的红外光谱图及核磁共振图谱发现,初步推断硫酸基团主要是在TPS的C-6位上发生取代。
S-TPS-D(DS为1.51)的清除自由基的能力、增强SOD活性的能力、降血糖活性都最强。硫酸酯化茶多糖的降血糖机制可能是通过促进机体对SOD等抗氧化剂的生物合成,提高小鼠机体内的SOD活性,从而增强机体清除自由基的能力,减轻四氧嘧啶所产生的自由基对胰岛β细胞的损伤。