论文部分内容阅读
本文考察了AMP对重组CHO细胞生长、代谢和HBsAg表达的影响,并分别采用离子对高效液相色谱法和流式细胞术分析了胞内核苷酸库和细胞周期的变化,对胞外AMP刺激蛋白表达的机理进行了探求。
AMP抑制了细胞的生长,但对HBsAg的表达具有刺激作用。4mmol/LAMP作用下,起初48h内,细胞的比生产速率提高了1.4倍,比生长速率下降了57%。随着培养的进程,比生产速率和胞内HBsAg含量进一步增加。至培养结束时,胞内HBsAg含量为对照的8.3倍,同时,培养液中的HBsAg浓度迅速增加为对照的164%。采用晚期连续换液培养,AMP使细胞的比生产速率和HBsAg浓度分别增加为对照的4.3倍和2.2倍。
AMP刺激了细胞对葡萄糖、谷氨酰胺和氨基酸的利用。营养物质的快速利用导致胞内ATP含量的迅速提高。在加入AMP24h内,胞内ATP含量迅速增加为对照的2.5倍。高含量的胞内ATP为细胞蛋白的生物合成提供了充足的能量来源。ATP和cAMP不能代替AMP的作用。
AMP增加了S期和G2期的细胞分率,而降低了G1期细胞分率。本研究中,HBsAg基因由SV40启动子控制,S期细胞分率的增加有助于蛋白表达,因此AMP对细胞周期的调节可能是其刺激HBsAg表达的另一原因。