背景：乳腺癌是起源于乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤，是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，也是我国女性发病率第一恶性肿瘤，严重危害女性的身心健康。研究表明，Notch3信号通路在乳腺上皮细胞的形成过程起重要作用。而ZEB1是重要的转录因子，调节细胞分化和组织特异性，参与多种组织的分化。本课题组前期研究发现，高表达长链非编码RNA—LncATB后Notch3表达水平增高，而ZEB1表达减少，但其中调控机制及对乳腺癌发生发展的影响尚未阐明。本研究将探索Notch3与ZEB1分子间的调控机制，及其通路对乳腺癌细胞侵袭转移过程影响，为乳腺癌患者治疗提供新的潜在靶点。
　　方法：应用在线数据库CCLE（CancerCellLineEncyclopedia）分析不同分子分型乳腺癌细胞株中Notch3和ZEB1基因mRNA表达水平及相关性。利用脂质体转染技术，及RT-PCR和蛋白免疫印迹法在mRNA和蛋白水平明确目标基因Notch3和ZEB1的转录和翻译水平。通过染色质免疫共沉淀来探索Notch3是否通过结合ZEB1启动子的CSL结合位点从而调控ZEB1的表达水平。通过CCK8实验、平板克隆形成实验、transwell实验、划痕实验分析不同处理组乳腺癌细胞的生物行为学功能，并应用乳腺癌基因芯片数据库Kaplan-MeierPlotter分析目标基因对乳腺癌患者生存期的影响。
　　结果：通过CCLE数据库分析发现，乳腺癌不同细胞株中ZEB1与Notch3的mRNA表达水平呈现负相关关系。通过RT-PCR和蛋白免疫印迹法，发现在乳腺癌细胞中Notch3负向调控ZEB1的表达，然而染色质免疫沉淀实验结果发现，Notch3不能与ZEB1启动子上的CSL结合位点直接结合，提示Notch3通过间接途径调控ZEB1的表达。miRNA靶基因预测miR-223可与ZEB1的3’-UTR区域结合，且其启动子上存在Notch3的CSL结合位点，提示Notch3可能通过上调miR-223的表达进而抑制ZEB1的翻译过程。RT-PCR结果显示，Notch3可正向调控miR-223的表达，而miR-223负向调控ZEB1的表达。CCK8实验、平板克隆形成实验表明，miR-223显著抑制乳腺癌细胞的增殖能力。且transwell实验、划痕实验结果显示，miR-223抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移能力。生存分析结果显示，在所有患者、激素受体阳性以及三阴性乳腺癌患者中，Notch3表达量高提示无复发生存期更长；在HER-2过表达的患者中，Notch3表达量与患者无复发生存期无显著相关。而在HER-2过表达的患者中，ZEB1表达量高的患者RFS更低，在所有患者、激素受体阳性以及三阴性患者中，ZEB1表达量与RFS无显著相关。
　　结论：Notch3在乳腺癌细胞可能通过上调miR-223从而抑制ZEB1的表达，进而抑制乳腺癌细胞的增殖，侵袭和转移。