第一部分头颈部肿瘤放疗患者传统骨代谢生化指标的检测及意义 目的：通过检测头颈部肿瘤放疗患者在接受不同剂量电离辐射时体液中的传统骨代谢生化指标，以了解其在放疗过程中的变化以及在监测放射性颌骨损伤中的价值，探讨电离辐射对成骨细胞和破骨细胞介导的颌骨骨代谢的影响，为进一步完善放射性颌骨损伤的病理机制提供理论依据。 对象和方法： 1．研究对象 中山大学附属第五医院肿瘤放疗科2008年7月至2009年1月期间的就诊患者中，选择临床确诊为头颈部肿瘤，并且符合本实验纳入标准的病例30例，其中男性19例，女性11例，年龄34～74岁，平均年龄53岁，疾病种类包括：鼻咽癌22例、舌癌3例；腮腺癌术后2例、上腭癌术后1例；木村病1例；非霍奇金淋巴瘤1例。这些患者适合并愿意接受国际抗癌联盟（International UnionAgainst Cancer，UICC）指引的规范化头颈部肿瘤放疗方案。研究前所有患者均签署知情同意书。 2．研究方法 2．1病例入选标准 1）经临床确诊的头颈部肿瘤患者，影像学检查肿瘤病变未侵犯骨组织，无骨转移及远处转移，患者适合并愿意接受UICC指引规范化放疗，颌骨在放射野内 2）详细询问患者现病史、过去史、婚育史、家族史，排除患有糖尿病、甲甲状腺和甲状旁腺功能改变、肝肾功能不全、骨折、骨质疏松、骨发育不良及各种遗传性骨病等影响骨代谢的全身性疾病 3）患者在放疗前半年内未服用激素、降钙素、钙片、双磷酸盐、氟化物等影响骨代谢的药物 4）患者知情同意。 2．2标本采集及处理 留取每个入组病例三个时段的血液和尿液标本：即分别在患者接受放疗前（0Gy）、接受电离辐射剂量30Gy后、接受电离辐射剂量50Gy后。按实验计划如期抽取患者清晨（7：00 am）空腹静脉血5 ml于不抗凝无菌试管中，室温下静置30 min，待血液凝固后，以3000r/ min的速度离心10 min，取上层血清当即检测血清碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、血钙（calcium，Ca）、血磷（phosphate，P）；同时留取患者晨尿10 ml，立即检测尿钙（urine cacalcium，UCa）和尿肌酐（urine creatinine，UCr）。 2．3标本的检测 血清ALP、Ca、P，尿Ca、Cr均使用日本日立7170S全自动生化分析仪测定，其中血ALP水平用AMP（α—aminc—αmethyl—l—propanol）缓冲液法测定；血P浓度用紫外直接法测定；血Ca和尿Ca浓度用偶氮胂三法测定，尿Cr用苦味酸不除蛋白法测定，为了减少尿液浓度对尿钙水平的影响，以尿Ca与尿Cr的比值（UCa/Cr）来表示尿钙水平变化。 2．4统计处理 所有数据的运算均在计算机SPSS17．0统计软件上进行。血清ALP、Ca、P浓度的变化比较采用配对t检验，实验数据用平均数±标准差（-x±s）表示；尿Ca/Cr水平变化用Mann—Whitney test检测，数据用中位数±标准差（M±SD）表示，两种统计方法均以P值<0．05为差异有显著性。 结果： 1．反映骨形成的传统骨代谢指标变化 1）患者在接受0Gy．30Gy、50Gy3种不同剂量的电离辐射后血清ALP、Ca水平变化：血清ALP、Ca在放疗前（0Gy）、接受辐射剂量30Gy、接受辐射剂量50Gy时其水平依次下降，表现出随着电离辐射剂量增加而逐渐下降的趋势，但统计学检验差异无显著性（P>0．05）。 2）患者在接受0Gy、30Gy、50Gy3种不同剂量的电离辐射后血清P水平变化：在三种不同的辐射剂量下血P浓度基本稳定，未见其由于电离辐射影响而产生变化的趋势，统计学检验差异亦无显著性。（P>0．05） 2．反映骨吸收的传统骨代谢生化指标变化 患者在接受0Gy、30Gy、50Gy3种不同剂量电离辐射后U Ca/Cr水平变化：U Ca/Cr水平随着接受电离辐射剂量增加而呈明显下降趋势，与放疗前（0Gy）比较，患者在接受接受辐射剂量30Gy及50Gy后，U Ca/Cr水平差异均有显著性。（0Gy vs30Gy P<0．05；0Gy vs50Gy P<0．05）。提示头颈部肿瘤患者在接受30Gy的电离辐射后，其颌骨组织中的破骨细胞活性和破骨细胞介导的骨吸收活动开始受到抑制。 结论： 1．传统骨形成生化指标血ALP、Ca、P在监测颌骨放射性骨代谢早期改变中不够敏感。2．传统骨吸收生化指标U Ca/Cr可能是能够监测颌骨放射性骨代谢早期改变的敏感的生化指标。 第二部分头颈部肿瘤放疗患者新—代骨代谢生化指标的检测及意义 目的：通过检测头颈部肿瘤患者在接受不同剂量电离辐射时血液中的新一代骨代谢生化指标血清骨碱性磷酸酶（bone alkaline phosphatase，BAP）、抗酒石酸酸性磷酸酶—5b（tartrate resistant acid phosphatase—5b，TRACP—5b），以了解血清BAP、TRACP—5b水平在放疗过程中的变化，探讨电离辐射对成骨细胞和破骨细胞介导的颌骨骨代谢的影响以及血清BAP、TRACP—5b在监测放射性颌骨损伤中的价值，为进一步完善放射性颌骨损伤的病理机制提供理论依据。 对象和方法： 1．研究对象：同第一部分 2．研究方法 2．1病例入选标准：同第一部分 2．2标本采集及处理： 留取每个入组病例三个时段的血液标本：即在患者接受放疗前（0Gy）、接受电离辐射剂量30Gy、接受电离辐射剂量50Gy。按实验计划定期抽取患者晨起（7：00）空腹静脉血5ml于不抗凝无菌试管中，室温静置30min，待血液凝固后，以3000r/min的速度离心10min，取上层血清，分装在无菌Eppendof（EP）管中，并做好标记，置于—70℃冰箱保存待测血清BAP、TRACP—5b。 2．3标本的检测 血清标本收齐后，采用酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，EⅡSA）测定血清中BAP、TRACP—5b水平。严格按照试剂盒的操作说明操作，在主波长405nm，次波长600nm的酶标仪上测得标准品、质控品和各标本的吸光度值（optical density difference，OD405），将标准品的浓度和测得标准品的OD405值输入计算机作回归分析，以标准品的OD405值为纵坐标、标准品的浓度为横坐标绘制出标准曲线，得出二者的相关方程，根据方程和质控品及标本的OD405值计算出各质控液、标本的浓度。 2．4统计处理 所有数据的运算均在计算机上应用统计软件SPSS17．0进行。对非正态分布的原始实验数据经对数转换为正态分布的资料，按正态分布作相关统计分析。实验数据用平均数±标准差（x±s）表示，采用配对t检验，P值<0．05为差异有显著性。 结果： 1．反映骨形成的新一代骨代谢生化指标BAP水平变化： 患者在接受0Gy、30Gy、50Gy3种不同剂量电离辐射后血清BAP水平变化：患者血清BAP水平随着电离辐射剂量的增加而逐渐下降，在接受辐射剂量50Gy后较放疗前（0Gy）平均水平下降33．3％，差异具有统计学意义（P<0．05）。结果提示头颈部肿瘤患者在接受50Gy剂量的电离辐射后，颌骨组织中的成骨细胞活性和成骨细胞介导的骨形成活动明显受到抑制，作为反映骨形成的指标，血清BAP与血清ALP、Ca在接受相同的电离辐射剂量下的变化趋势是一致的，但是BAP的差异具有显著性。 2．反映骨吸收的新一代骨代谢生化指标TRACP—5b水平变化： 患者在接受0Gy、30Gy、50Gy3种不同剂量电离辐射后血清TRACP—5b水平变化：患者血清TRACP—5b水平在3种辐射剂量下未见有明显变化，差异亦无统计学意义。（P>0．05） 结论： 1．新一代骨形成生化指标血清BAP可能是能够监测颌骨放射性骨代谢早期改变的有价值的敏感指标。 2．新一代骨吸收生化指标TRACP—5b可能在监测颌骨放射性骨代谢早期改变中不敏感。 3．新一代骨形成生化指标BAP较传统指标ALP在反映颌骨放射性骨代谢改变中更加敏感。