论文部分内容阅读
本研究以产蛋期扬州鹅为研究材料,采用Oligo(dT10)M（A/G/C）为锚定引物与23个随机引物之间共69个组合的RT-PCR反应对成熟卵泡总RNA进行DDRT-PCR分析,并利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染技术分离DDRT-PCR产物,共获得差异条带18条。经过PCR再扩增、电泳检测和纯化,共得到差异显示的cDNA片段10条。经二次PCR与第一次PCR结果比较,再经Dot-blot验证后得到7条差异表达cDNA片段,委托上海杰瑞生物工程有限公司克隆测序,获得5个表达序列标签,且经1.5%琼脂糖电泳检测显示这些条带比非差异显示条带弱,推测差异表达的基因表达丰度低。五个差异显示ESTs去除载体序列后用Blast检索发现:在这5条差异表达片段中,ESTYZGF01与人甲硫氨酸腺苷基转移酶II（MAT II）同源,同源性为95%,ESTYZGF02与鸡mKIAA0840 protein基因同源,同源性为94%。其余ESTYZGF03、ESTYZGF04、ESTYZGF05个与已知基因或序列无任何同源性,可能是尚未发现的新基因。最小的排卵前卵泡（SPF） MAT IIβ亚基表达水平的上升可能通过增加E2合成途径的原料来增加E2水平,或上调抗凋亡基因的表达而利于卵泡的选择。而FBXL-7可能通过参与SCF复合体的形成,降解一种转录的激活因子或抑制因子而参与卵泡的选择。