靶向siRNA阻断NF-kB信号通路对神经母细胞瘤侵袭转移的影响

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目的探讨重组慢病毒介导siRNA(小干扰RNA)靶向阻断NF-κB信号通路对人神经母细胞瘤QDDQ—NM1细胞侵袭转移的影响。  方法根据人p65基因序列,设计针对基因不同靶点的siRNA1、siRNA2、siRNA3、siRNA44条siRNA序列及其对照序列NC,慢病毒介导转染QDDQ—NM1,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot法从设计的4条干扰序列中筛选出siRNA1序列在转染72h干扰效果最好。在转染72h后,采用RT-PCR和Western blot法检测NF-κB下游基因CXCR4、VEGF mRNA转录和蛋白表达情况;Transwell小室检测各组间瘤细胞的转移侵袭能力。  结果转染72h后,PT-PCR显示,siRNA1-NF-κB CXCR4、VEGFmRNA表达分别为空白对照组0.66倍、0.76倍,差异有统计学意义(P<0.05); Western blot显示,siRNA1-NF-κ B CXCR4、VEGF蛋白表达分别为空白对照组0.67倍、0.76倍,差异有统计学意义(P<0.05); Transwell小室显示,Ⅰ(实验组)、Ⅱ(空载对照组)、Ⅲ(空白对照组)穿过Matrigel胶的细胞数分别为34.6000±3.9749;45.6000±2.3021;54.8000±2.3874,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。  结论慢病毒介导的siRNA通过下调NF-κB下游基因CXCR4、VEGF的表达抑制神经母细胞瘤的侵袭转移,可为下一步肿瘤治疗提供理论基础。
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