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背景与目的乙酰胆碱作为传统的神经递质被人们所熟知,近年来研究发现哺乳动物免疫细胞可表达包括蕈碱受体(M受体,MAChR)、烟碱样受体(N受体,NAChR)、合成ACh所需的乙酰转移酶以及分解ACh的乙酰胆碱酯酶[1],同时Fujii等也发现被PHA刺激过的大鼠胸腺细胞分泌ACh明显有所提高[2]。其证明了在免疫系统中存在合成分解ACh,并通过自分泌或旁分泌释放ACh作用于自身或周围细胞从而调节免疫系统功能的非神经源性胆碱能系统。但国内外对其在免疫机制中的作用认识不一,且多针对外周淋巴细胞进行研究,本实验旨在通过检测体外培养大鼠胸腺组织细胞的活力并分析其T细胞分化不同亚群所占比例,初步探讨非神经源性乙酰胆碱对中枢免疫系统的作用和作用途径。方法使用植物血凝素(PHA)刺激体外培养大鼠胸腺组织细胞,根据加入试剂分为A组(空白对照)、B组(阿托品)、C组(维库溴铵)及D组(阿托品+维库溴铵),培养后Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞活性,流式细胞术分析T细胞亚群。采用单方差分析,SNK-q法两两比较分析各组之间差异。结果1.CCK-8法细胞活力分析：各组大鼠胸腺组织细胞在450nm处与空白组校对后OD值(见表1),统计数据通过单向方差分析得：F=24.945, P=0.000<0.01, SNK-q法两两比较,A、D组之间细胞活力差异无统计学意义(P>0.05),C组细胞活性明显高于A、B、D组(P<0.05),B组细胞活力低于A、C、D组(P<0.05)。2.流式细胞术分析：检测A、B、C、D组大鼠胸腺组织细胞中CD3+CD4+细胞及CD3+CD8+细胞比例(见表1、图A-H)。CD3+CD4+细胞比例统计数据通过单向方差分析得：F=1.469,P=0.239>0.05,不能认为各处理组之间差异有统计学意义；CD3+CD8+细胞比例统计数据通过方差分析得：F=0.848,P=0.477>0.05,不能认为各处理组之间差异有统计学意义。CD3+CD4+细胞与CD3+CD8+细胞数量之比统计数据通过单因素方差分析得：F=1.475,P=0.238>0.05,不能认为各处理组之间差异有统计学意义。结论1.ACh能通过N受体降低大鼠胸腺组织细胞活力,对其增殖起抑制作用。2.ACh能通过M受体降低大鼠胸腺组织细胞活力,对其增殖起增强作用。3.在大鼠胸腺细胞被PHA激活的条件下,M、N受体均接受ACh作用时,细胞活力无明显影响。4.ACh对大鼠胸腺细胞分化为CD3+CD4+细胞、CD3+CD8+细胞无明显影响,对其分化无明显倾向性。