研究背景及目的:消化道慢性炎症的反复发作、缓解的过程可以招致多种肠道疾病的产生。炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是目前研究较为热门的慢性肠道疾病,克罗恩病(Crohn’s disease,CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是其两种亚型,均与反复发作的肠道炎症有关。目前证据表明,激活的粘膜免疫细胞、表达增加的促炎因子以及功能紊乱的肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IECs)可导致IBD的发生。果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是一种高度保守的蛋白——多梳抑制复合物2(polycomb inhibitor complex 2,PRC2)的主要催化亚基,通过组蛋白H3第27位赖氨酸的三甲基化(H3K27me3)在调控基因沉默中起着重要作用,其在肿瘤中表达常常发生失调。EZH2在一些发病机制与免疫和炎症相关的疾病如炎症性肠病、系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎等中表达也有变化,并参与了其的发展过程。坏死性凋亡是目前研究较为热门的,最近发现的一种与细胞凋亡不同的程序性坏死。坏死性凋亡可强烈触发或放大炎症,坏死性凋亡过程中分子表达的失调可导致上皮细胞过度死亡和肠道炎症。近年来,发现IBD病人的肠道细胞中,也存在坏死性凋亡的现象。以上结果提示异常的坏死性凋亡的过程或许推进了肠道炎症的发展。目前已有研究发现EZH2的下调可促进结肠炎的发展和细胞凋亡。然而,EZH2在肠上皮细胞的坏死性凋亡过程中的作用目前仍然缺少研究。本研究探讨EZH2在人上皮结直肠癌细胞株Caco-2和小鼠实验性结肠炎中的作用及其对炎症因子的潜在调控作用,并首次探讨EZH2与肠上皮细胞坏死性凋亡的关系及其中涉及的分子机制与信号通路。方法:(1)两种小鼠结肠炎模型:采用含4%的葡聚糖硫酸钠(DSS)的高压灭菌水喂养8周龄的C57BL/6系小鼠构建小鼠UC模型;采用2.0mg 2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)和50%乙醇混合的150u溶液灌肠8周龄的C57BL/6系小鼠构建小鼠CD模型。(2)结肠炎症细胞模型:采用炎症介质LPS、TNF-α、IL-1 β和IFN-γ共同刺激Caco-2细胞。坏死性凋亡细胞模型:采用TNF-α和Z-VAD-fmk共同刺激Caco-2细胞。(3)人体CD及UC病人结肠病变部位切片及非IBD患者的正常肠道黏膜组织切片:通过免疫组织化学技术检测EZH2在不同的结肠组织中的表达情况。(4)SiEZH2转染Caco-2细胞:设立阴性对照组,单纯siEZH2转染实验组,单纯炎症介质刺激组和siEZH2转染+炎症介质刺激组。(5)荧光定量PCR检测细胞模型中炎症因子和趋化因子在mRNA水平上的表达变化。(6)Western blot 检测 EZH2 下调后对 c-Jun 氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal Kinase,JNK)通路与受体相互作用蛋白 1/3(Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1/3,RIPK1/RIPK3)坏死性凋亡通路的影响。(7)在坏死性凋亡的细胞模型中,敲低EZH2的表达,检测RIPK1/3和JNK通路相关蛋白的表达变化。结果:EZH2的表达水平在体外和体内模型以及IBD患者中均下降。敲低EZH2的表达后,炎症因子和趋化因子表达上升。JNK通路随着EZH2的下调被激活。在坏死性凋亡细胞模型中,EZH2表达下调,磷酸化的JNK和c-Jun表达上调;敲低EZH2后,RIPK1和RIPK3的表达增加。结论:EZH2的减少能促进肠道炎症的加重和坏死性凋亡的发生,其可能是通过JNK通路调控肠上皮细胞的炎症反应和坏死性凋亡的过程。因此,可能EZH2能作为IBD潜在的治疗靶点。