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本研究探讨了促卵泡素(FSH)与促黄体素(LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响。利用离体猪卵巢上采取的卵丘-卵母细胞复合物(COCs),在含不同浓度促卵泡素(FSH)与促黄体素(LH)的成熟液中进行体外培养,比较和分析各组成熟率的差异,并用免疫组化方法比较和分析了不同培养条件下COCs颗粒细胞上促卵泡素受体(FSHR)与促黄体素受体(LHR)的表达差异,从而找到FSH与LH的最佳剂量和作用时间,进一步提高体外成熟的效率,结果如下:
1.FSH与LH在猪卵母细胞体外成熟过程中可发挥促进作用。成熟液中单独添加FSH时,其最佳浓度为10IU/ml;单独添加LH时,其最佳浓度为1IU/ml;同时添加两种激素时,二者最佳浓度均为1IU/ml。猪卵母细胞体外成熟培养时间建议以44~46小时为宜。
2.应用免疫组化方法对FSHR与LHR进行测定,方法准确可行。在新鲜采集的细胞及培养结束后的细胞上,FSHR既存在于卵丘细胞上,又存在于卵母细胞上;而LHR仅存在于卵丘细胞上。
3.成熟液中添加1IU/mlLH时,LHR数量最多,卵母细胞成熟率最高。可以得出,受体数量与成熟率间有一定联系。在含有1IU/mlLH的成熟液中添加不同浓度的FSH时,对LHR的表达起到抑制作用。成熟液中添加FSH时,可促进FSHR的表达,并且呈浓度依赖性。
4.促性腺激素受体的表达随体外培养时间的变化而发生变化:在体外培养过程的Oh、12h、24h、36h、44h、48h六个不同时间段中,随着培养时间的延长,FSHR表达量呈递减趋势。FSH在体外成熟培养前期发挥其主要的促成熟作用;LHR相对表达量呈相反趋势变化,随着体外培养时间的延长,LHR相对表达量逐步呈上升趁势。LH在体外成熟培养后期发挥其主要的促成熟作用。