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目的:通过构建L6细胞胰岛素抵抗模型,上调内脏脂肪素(visfatin)表达并检测磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)通路及其下游信号因子叉头框蛋白1(Forkhead box O1,Fox O1)的蛋白表达变化,从而探讨visfatin对骨骼肌胰岛素抵抗的影响。方法:通过建立DMEM培养液和高浓度磷脂酸(Phosphatidic acid,PA)诱导L6细胞胰岛素抵抗模型:将细胞分为control组、PA组、insulin组、PA+insulin组,PA组板加入250μM PA;insulin组加入100n M insulin,PA+insulin组加入250μM PA+100 n M insulin,待处理0h、6h、12h、24h后收集各组培养基上清。用免疫荧光试验方法验证L6细胞株分化成功;用葡萄糖过氧化物酶法测定细胞培养基上清液的葡萄糖含量验证胰岛素抵抗模型成立;给予胰岛素抵抗骨骼肌细胞模型visfatin过表达腺病毒载体,用Western blot法检测L6细胞中visfatin蛋白表达水平验证病毒构建成功;分别采用过表达visfatin的腺相关病毒(AAV)和空载对照腺相关病毒(PC)感染L6细胞;将细胞分为空载对照腺相关病毒组(PC组)、PC+PA组、过表达visfatin组、visfatin+PA组,四组均加入100 n M Insulin,PC+PA组和visfatin+PA组再加入250μM PA处理24小时后收集培养基上清,用葡萄糖过氧化物酶法测定细胞培养基上清液的葡萄糖含量;利用Western blot检测L6细胞PI3K、Akt蛋白表达水平及其下游调控胰岛素敏感性的关键分子Fox O1的蛋白表达变化。结果:1.胰岛素抵抗模型的验证:PA组与control组各处理0、6、12、24小时上清液中葡萄糖含量对比,均无显著差异(P>0.05);PA+insulin组与insulin组各处理0小时上清液中葡萄糖含量对比,无显著差异(P>0.05),PA+insulin组与insulin组各处理6小时对比,上清液中葡萄糖含量PA+insulin组中明显高于insulin组(P<0.05);PA+insulin组与insulin组各处理12小时对比,上清液中葡萄糖含量PA+insulin组中明显高于insulin组(P<0.05),PA+insulin组与insulin组各处理24小时对比,上清液中葡萄糖含量PA+insulin组中明显高于insulin组(P<0.01)。2.visfatin过表达腺病毒的验证:过表达visfatin组与正常对照组visfatin蛋白表达水平比较,过表达visfatin组中visfatin蛋白表达水平明显高于正常对照组(P<0.001)。3.过表达visfatin对葡萄糖的影响:PC+PA组与PC组相比较,经PA处理后的组上清液中葡萄糖含量显著升高(P<0.001);过表达visfatin组与PC组比较,上清液中葡萄糖含量过表达visfatin组明显低于PC组(P<0.001);过表达visfatin+PA组与过表达visfatin组比较,经PA处理后的过表达visfatin组上清液中葡萄糖含量显著升高(P<0.001)。4.过表达visfatin对PI3K/Akt通路的影响:过表达visfatin组与PC组及visfatin+PA组与PC+PA组中PI3K蛋白表达水平比较,均无显著差异(P>0.05);过表达visfatin组与PC组中p-Akt蛋白表达水平比较,过表达visfatin组中p-Akt蛋白表达水平高于PC组(P<0.01);过表达visfatin+PA组与PC+PA组p-Akt蛋白表达水平比较,过表达visfatin+PA组中p-Akt蛋白表达水平高于PC+PA组(P<0.001);过表达visfatin组与PC组中Fox O1蛋白表达水平比较,过表达visfatin组中Fox O1蛋白表达水平显著降低(P<0.001);过表达visfatin+PA组与PC+PA组中Fox O1蛋白表达水平比较,过表达visfatin+PA组中Fox O1蛋白表达水平低于PC+PA组(P<0.01)。结论:在PA诱导的L6细胞中,过表达visfatin能够调节PI3K/Akt通路的活性,下调Fox O1的蛋白表达,显著促进L6细胞对葡萄糖的摄取,改善胰岛素抵抗。