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目的胃癌是一种多见的恶性疾病,在中国的发生率较高。由于胃癌的早期诊断较困难,术后生存率较低,故单独使用手术治疗差,往往需要结合放化疗以期达到治愈。虽然胃癌的放化疗取得了部分效果,但是化疗药物的治疗效果仍未达到预期效果而且毒副反应较严重。故需要开发一种可以杀死肿瘤细胞且毒副反应低的新型抗肿瘤药物,目前较热门方法便是从天然产品中提取有效活性物质。毛壳素是从毛壳菌属真菌产生的小分子天然产物,在血液系统肿瘤的临床诊疗方面有较好的疗效。同时,毛壳素在实体瘤的治疗方面拥有广阔的前景。本课题旨在探究毛壳素通过促进胃癌SGC-7901细胞出现自噬,发挥毛壳素抑制肿瘤细胞增殖作用,并探究毛壳素在诱导细胞自噬中的作用机制,为胃癌的临床诊疗增加理论支撑。方法通过CCK8实验检测毛壳素对胃癌SGC-7901细胞活力的影响;使用流式细胞术Annexin-V-FITC/PI双染法检测毛壳素对胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用。利用光学显微镜观察毛壳素干预胃癌SGC-7901细胞后细胞形态学改变和荧光显微镜观察被MDC染色的自噬体;通过western blotting检测自噬相关蛋白LC3蛋白和p62蛋白的相对表达量的改变,反映细胞自噬活化程度在分子生物学水平上的变化。最后使用western blotting检测调控自噬的经典信号通路PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白分子的表达量的改变,探究其是否参加毛壳素诱发的自噬过程。结果毛壳素能抑制胃癌SGC-7901细胞增长,随着毛壳素浓度的增大抑制作用会变强。流式细胞术Annexin-V-FITC/PI双染检测结果如下:同对照组相比,当使用0.25、0.5和1.0mmol/L的毛壳素处理胃癌SGC-7901细胞后,早期凋亡率分别为2.37%、2.73%、5.17%,晚期凋亡及坏死率分别为9.47%、13.67%、18.63%。光学显微镜检测结果如下:毛壳素作用胃癌SGC-7901细胞后细胞形态发生明显改变,随着毛壳素浓度的增大,细胞会出现变圆、缩小,最终脱离瓶壁而悬浮在培养液中。荧光显微镜检测结果如下:随着毛壳素浓度的增大,可观察到的荧光光点增多。Western blotting中:随着毛壳素给药时间和给药浓度变大,胃癌SGC-7901细胞中LC3-II蛋白的表达水平也增加。最后Western blotting中:随着毛壳素浓度的增大,Akt、mTOR磷酸化蛋白的相对表达量也会降低。结论毛壳素能够抑制胃癌SGC-7901细胞增长。在毛壳素促进胃癌SGC-7901细胞出现死亡的过程中,细胞自噬和凋亡都有激活,而细胞凋亡以晚期凋亡和坏死为主。毛壳素可能通过PI3K/Akt/mTOR通路来调节细胞自噬。