BRM基因过表达对胃癌细胞系hTERT选择性剪接的影响

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目的:Brm是染色质重塑复合物SWI/SNF (switch/sucrose non-fermentable)的催化亚单位,具有DNA依赖的ATP酶活性,能够通过调节染色质的结构来影响基因的表达。Brm能够影响多个基因的选择性剪接,其中人端粒酶逆转录酶(hTERT)是Brm的调控目标之一。在胃癌的演进过程中Brm和hTERT表达异常具有重要作用。本课题拟建立Brm瞬时转染的胃癌细胞模型,并研究Brm高表达对hTERT mRNA选择性剪接模式的调控作用,进一步探讨胃癌发生的分子机制。方法:用hBrm cDNA表达载体pCG-Brm-CMV转染胃癌细胞系MGC-803,应用RT-PCR和Western-blot技术分别检测转染前后细胞中Brm mRNA和蛋白的表达,选择hTERT前体mRNA的2个选择性剪接位点a和β,横跨位点设计引物,采用半巢式PCR特异性扩增4个hTERT选择性剪接变异体(ASVs) hTERT a+B+ASV, hTERT a+β-ASV, hTERT a-β+ASV, hTERT a-β-ASV,通过琼脂糖凝胶电泳检测各ASVs在转染前后胃癌细胞中的表达水平。结果:1. Brm mRNA在胃癌细胞系MGC-803中呈低水平表达,在用hBrm cDNA表达载体pCG-Brm-CMV转染后的胃癌细胞系MGC-803中表达升高。2. Brm蛋白在于转染hBrm cDNA表达载体pCG-Brm-CMV之前呈低水平表达,在转染后呈高水平表达。3. hTERT a+β+ASV在转染hBrm cDNA表达载体pCG-Brm-CMV之后的表达水平明显高于转染前。hTERT a+β-ASV在转染后不表达,在转染前表达。4.本实验未检测到hTERT a-β+ASV及hTERT a-β-ASV。结论:在胃癌细胞系MGC-803中,染色质重塑复合物SWI/SNF的催化亚单位Brm能够调节hTERT mRNA选择性剪接的模式,可以使hTERT a+β+ASV的表达升高,hTERT a+β-ASV的表达降低,从而进一步影响端粒酶的活性,本研究为阐明胃癌的分子机制提供了重要的理论依据。
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