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为阐明烷基酚对两栖动物精巢功能的干扰机制,探索烷基酚对基因表达的影响,将雄性中国林蛙(Rana chensinensis)暴露于10-6mol/L辛基酚(4-tert-Octylphenol, OP)水体,在处理30天取其精巢为研究材料,用抑制性差减杂交技术(suppression subtractive hybridization, SSH)构建正常和OP暴露的中国林蛙精巢的差减cDNA文库,筛选OP对中国林蛙性腺发育影响的基因,以求探讨OP干扰两栖动物的生殖内分泌和生长发育的分子机制。1.成功构建了中国林蛙10-6mol/L OP暴露后中国林蛙精巢的差减cDNA文库,共获得180条表达序列标签(expressed sequence tag, EST)。这些差异表达基因主要为结合蛋白、ATP合酶、钙结合蛋白、肌动蛋白、延伸因子、线粒体和激酶的相关基因。值得注意的是,其中出现妊娠特异性β1糖蛋白9基因(pregnancy specific beta-1-glycoprotein9, PSG9)和妊娠相关血浆蛋白A基因(pregnacy-associated plasma protein A, PAPP-A)等雌性胎生动物特异表达的基因；并有个别癌基因表达。基因本体(Gene Ontology, GO)分类显示,生物过程有87条,细胞成分有106条,分子功能有68条(含一因多效)。在生物过程中,代谢过程占45.98%,细胞过程占24.14%,妊娠过程占13.79%,转录调控占6.90%,应激反应3.45%,炎症反应3.45%,基因表达1.15%,氧化还原过程1.15%。在细胞成分中,细胞部分占45.28%,细胞器成分占29.25%,细胞膜占14.15%,细胞骨架占11.32%。在分子功能中,延伸因子活性占29.41%,分子结构活性占23.53%,翻译调节活性占22.06%,结合活性占14.71%,催化活性占7.35%,转运活性占2.94%。在生物过程中代谢过程所占比例最高,在细胞成分中细胞部分所占比例最高,在分子功能中,延伸因子活性所占比例最高。这些结果表明OP对中国林蛙的精巢的生长发育产生重要影响,其中主要影响了代谢过程、细胞质成分和延伸因子活性,并且出现了与雌性化效应相关的基因。2.运用半定量RT-PCR (Semi-quantitative RT-PCR)方法分别检测差减cDNA文库中PSG9和PAPP-A,这两个基因正常情况下仅在哺乳动物的胎盘中表达,在精巢、卵巢、肝脏和脑等组织中均不表达。在10-6mol/L OP暴露30天的中国林蛙精巢中,PSG9和PAPP-A均表达。并且PSG9和PAPP-A在电泳图中条带亮度明显高于管家基因β-nctin,略宽,表明表达水平高于β-actin。而对照组的PSG9和PAPP-A均不表达。所以设想OP诱导了PSG9和PAPP-A在中国林蛙精巢中的表达,从而可能干扰精巢的正常发育。