向日葵SRAP分子标记遗传连锁图谱的构建

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本文选用内蒙古自治区农牧业科学院提供的抗旱性差异显著的自选自交系K55、K58为亲本,获得了187个F5RILs群体,利用SRAP分子标记技术构建了一张向日葵遗传连锁图谱,为向日葵数量性状定位(QTL)、基因克隆、分子标记辅助育种等研究奠定了基础。主要研究结果如下:(1)利用两个自选自交系K55、K58为亲本,杂交获得F1代,F1代自交获得F2代,再采用单粒传的方法到F5代,获得了187个F5RILs群体。(2)采用单因素试验法,对Mg2+、dNTPs、引物浓度、Taq DNA聚合酶、模板DNA分别设置5-7个水平梯度,筛选出适宜的用量范围,以此为基础,再通过L16(45)正交试验设计,建立了油葵SRAP-PCR的最佳反应体系:20μL体系中含10×Buffer2μL, Mg2+2.75mmol/L, dNTPs0.18mmol/L, Taq DNA聚合酶1.25U,正反引物各0.3μmol/L,模板DNA60ng,最佳退火温度为52.2℃。(3)随机选取18个正向引物,与18个反向引物组成324对引物组合。用两个亲本K55、K58对324对SRAP引物组合进行筛选,共筛选出多态性好的引物63对,63对引物共扩增出多态性位点232个,平均每对引物组合扩增出3.68个多态性位点,集中在100~1500bp之间。(4)对扩增出的232个多态性位点进行卡方检验,共有34个标记出现了偏分离,偏分离比例为14.66%,其中偏向亲本K55的标记有22个,占所有偏分离位点的64.7%,偏向亲本K58的标记有12个,占所有偏分离位点的35.3%。(5)利用JoinMap4.0构建向日葵的遗传连锁图谱,构建出的图谱共有182个标记进入17个连锁群,连锁群包括标记4~31个,连锁群长度范围为47.9~252.3cM。遗传图谱覆盖基因组总长度为2012.5cM,平均标记间距为13.44cM。每个连锁群的平均标记间距5.16~24.02cM,最大的标记间距为42.8cM,最小的标记间距为0.1cM,在LG4连锁群上存在一个偏分离热点区域。
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