为了提高牛体外受精卵的发育和冷冻保存的效果，本文以从屠宰场收集的卵巢为试验材料，吸取2～6mm的卵泡中的未受精卵按常规方法进行体外培养和体外受精，对体外受精卵进行了以下试验。 (1)以TCM-199加10％CS为基础发育培养液，与卵丘细胞共培养，在培养过程中，不交换培养液与交换培养液进行了对比试验，结果二者的卵裂率(66.9％／60.4％)和囊胚发育率(14.2％／13.4％)没有显著差异。 (2)以TCM-199加10％CS为基础发育培养液，在基础培养液中分别添加0、5、10、20、25、50mM的牛磺酸，与卵丘细胞共培养，囊胚发育率分别为20.9％、28.0％、34.7％、25.7％、28.6％、22.6％。添加10mM牛磺酸组极显著高于对照组(p＜0.01)，其他各试验组与对照组均无显著差异。各试验组相比，添加10mM牛磺酸组与5mM牛磺酸组以及25mM牛磺酸组无显著差异，10mM牛磺酸组却极显著地高于50mM牛磺酸组(p＜0.01)，显著高于20mM牛磺酸(p＜0.05)。表明在以TCM-199为基础培养液并与卵丘细胞共培养的条件下，添加牛磺酸可以促进胚胎发育并且存在着一个适宜的浓度。本试验结果显示添加10mM牛磺酸可极显著地提高囊胚发育率。 (3)为了探明在成熟培养和发育培养的不同阶段添加牛磺酸对胚胎发育的影响，设立了以下五组试验。IVM组：只在卵母细胞成熟培养液中添加10mM的牛磺酸；IVC(0～48h)组：只在体外受精后发育培养的0～48h添加10mM的牛磺酸；IVC(48h～)组：从发育培养的第48h开始一直到结束，使用添加10mM的牛磺酸的发育培养液；IVM+IVC组：在成熟培养液和发育培养液中全程添加10mM的牛磺酸；对照组：常规方法进行成熟培养和发育培养。结果囊胚发育率分别为32.2％、36.1％、41.9％、44.0％、31.7％。IVC(48h～)组与IVM+IVC组均显著高于对照组和IVM组(p＜0.05)，而IVM组、IVC(0～48h)组与对照组无显著差异。另外，IVC(0～48h)组与IVC(48h～)组和IVM+IVC组之间没有显著差异。表明在以TCM-199为基础培养液与卵丘细胞共培养条件下，在发育培养后期或者在成熟培养和发育培养全程添加10mM牛磺酸可以显著提高囊胚发育率，显示牛磺酸对卵母细胞成熟和受精卵的发育有一定的促进作用。 (4)为了探讨Direct冷冻囊胚的效果，设立了以下四组试验。试验1：以1.5M PG为冷冻保护液，0.2M SU为稀释液，Direct法冷冻保存；试验2：以1.5M PG为冷冻保护液，0.2M TPE为稀释液，Direct法冷冻保存；试验3：以1.5M PG为冷冻保护液，20％CS+PBS为稀释液，Direct法冷冻保存；对照(One 山东师范人学硕}_学位论文牛体外受精及胚胎冷冻保存技术研究step):以1 .4M GLJY为冷冻保护液，0.3M SU为稀释液，One step法冷冻保存。融解后的生存率分别为87.0%、87.8%、84.6%、92.1%，均没有显著的差异。但培养48h胚胎的发育率分别为59.4%、51.4%、43.1%、72.4%，试验2区显著地低于对照组(p<0.05)，试验3区与对照组有极显著差异(p<0.01)，试验1区与对照组没有显著差异，各试验组之间没有显著差异。培养72h囊胚孵化率分别为49.3%、41.9%、27.7%、55.3%，除试验3区与对照组有极显著差异(p<0 .01)外，其他各组均与对照组无显著差异，各试验组之间也没有显著差异。以上数据表明，以1 .SMPG为冷冻保护液，以0.ZMSU为稀释液，Direct法冷冻牛囊胚期胚胎，解冻后囊胚的生存率、发育率和孵化率与on est即法均没有显著差异。以1 .SM PG为冷冻保护液，以0.ZM TRE为稀释液，Direct法冷冻牛囊胚期胚胎解冻后囊胚的发育率显著低于one St即法，但孵化率没有显著差异。 本研究认为在牛体外受精卵的体外发育培养过程中，不必进行培养液的交换，对胚胎发育并无不良影响。在牛体外受精卵的发育培养液中添加10mM牛磺酸对胚胎发育有一定的促进作用，特别在成熟培养和发育培养全过程或者在发育培养的后期添加牛磺酸的效果更好。以1 .SMPG为冷冻保护液，0.ZMSU为稀释液，Direct法冷冻保存牛体外受精囊胚的效果与onest即法没有显著差异。0 .ZM TRE作为稀释液，囊胚的发育率低于One St即法，但生存率和孵化率没有显著差异。本研究对于提高牛外受精卵的培养效果和冷冻效果提供了科学的实验数据，对牛体外受精研究和应用有一定的参考价值。