目的：　　 近年来,肺癌的发病率明显升高已经成为不争的事实,已经引起广泛重视,在一些发达国家和地区男性肺癌的发病率和死亡率居各种恶性肿瘤之首,女性发病率虽然仅次于乳腺癌而居第二位,但其死亡率却占第一位。每年新发病例数已达百万计。并在所有恶性肿瘤中导致的死亡率中占第一位,严重威胁人民群众的生命。　　 目前肺癌的治疗仍是以手术为主的综合治疗,虽然近年来包括一些新的治疗手段的采用如分子靶向治疗和新辅助化疗,但肺癌总的预后仍然很差,五年生存率在15%-20%,主要原因是肺癌的转移。肺癌的转移方式包括直接蔓延,血道转移和淋巴道转移。其中淋巴道转移是最常见的转移方式,据统计约半数以上的肺癌病例有肺内,肺门或纵隔淋巴结转移,而且纵隔淋巴结转移居多。这是影响肺癌预后的主要因素之一。　　 近年来,HMGA2与肿瘤的关系已经引起广泛关注。HMGA2是一种核非组蛋白,也是构建转录因子,在活体内他们不仅是染色质的构建组成成分,而且是辅助基因转录成分。并且在多种良性疾病和良、恶性肿瘤中都有表达,表明HMGA2在细胞分化和增殖中扮演重要角色,而且在哺乳类动物的生长和发育中有重要作用。可能是肿瘤远处转移和预后的预测因子。　　 目前,HMGA2在肺癌组织中表达的相关研究较少,还没有关于在HMGA2与肺腺癌淋巴结转移相关性的报道,也没有肺腺癌组织中HMGA2和ERCC1基因相关性的研究报道。HMGA2在肺腺癌淋巴结转移中的作用及使用抗HMGA2特异性抗体治疗肺腺癌转移的实验研究尚未见报道。　　 本研究探讨在肺腺癌中HMGA2和ERCC1基因的表达,分析两者调控的相关性及HMGA2与肺腺癌淋巴结转移的相关性并预测肺腺癌淋巴结远处转移的可行性。并研究抗HMGA2特异性抗体对肺腺癌细胞系A549生物学行为的影响。通过抗HMGA2特异性抗体联合化疗药物作用于肺腺癌细胞系A549,研究抗HMGA2特异性抗体协同常规化疗药治疗肺腺癌的可能性。　　 方法：　　 1、以肺腺癌组织为模型,采用抗HMGA2单克隆抗体,抗ERCC1单克隆抗体以免疫组化法和western-blot法检测在正常肺组织,无淋巴结转移的肺腺癌组织,有淋巴结转移的肺腺癌组织,淋巴结转移癌和非淋巴结转移癌中两种蛋白的表达状况。研究两种蛋白在这些组织中的表达差异性和相关性。采用Realtime-PCR法检测上述组织中HMGA2mRNA和ERCC1mRNA的含量和差异性。采用RT-PCR法及测序法检测在无淋巴结转移的肺腺癌组织和有淋巴结转移的肺腺癌组织之间HMGA2基因的编码区有无基因序列的差异。　　 2、采用体外细胞培养肺腺癌细胞系A549,抗HMGA2特异性抗体干扰A549,MTT法检测干扰作用前后A549细胞系的增殖活性变化。用western-blot法和Realtime-PCR法检测抗HMGA2特异性抗体干扰A549前后HMGA2蛋白和mRNA的变化情况。并就抗HMGA2特异性抗体对肺腺癌细胞系A549的生长抑制的影响进行相关性分析。　　 3、使用三种不同浓度的常用化疗药物紫杉醇、VP16和DDP与抗HMGA2特异性抗体联合作用于肺腺癌细胞系A549,MTT法检测不同浓度和不同时间作用后肺腺癌细胞系A549的增殖变化,探讨抗HMGA2特异性抗体与化疗药物联合应用在肺腺癌化疗中的治疗作用和意义。　　 结果：　　 1、肺腺癌组织中HMGA2和ERCC1的表达及相关性　　 (1)肺腺癌组织中HMGA2和ERCC1表达情况:免疫组化结果显示HMGA2在正常肺组织,无淋巴结转移的肺腺癌组织,有淋巴结转移的肺腺癌组织中的阳性表达率分别为0%,54.2%,81.6%,与正常肺组织相比,肺腺癌组织HMGA2蛋白表达阳性率有显著差异(P＜0.01);与无淋巴结转移肺腺癌组织比较,HMGA2在有淋巴结转移的肺腺癌组织中的阳性表达率也有统计学差异(P＜0.05)。HMGA2在非淋巴结转移癌和淋巴结转移痛组织中的蛋白表达阳性率分别为0%,47.3%,两者的HMGA2表达阳性率有显著差异(P＜0.01);与周围正常肺组织相比表达有明显差异(P＜0.01)。在肺腺癌组织中,低分化腺癌强阳性表达率高于高分化肺腺癌组织,两者表达有显著差异(P＜0.01)。ERCC1在正常肺组织,无淋巴结转移的肺腺癌组织,有淋巴结转移的肺腺癌组织,非淋巴结转移癌和淋巴结转移癌组织中的蛋白表达表达阳性率分别为12.7%,2.5%,0%,8.6%,0%,与无淋巴结转移的肺腺癌,有淋巴结转移的肺腺癌相比,在正常肺组织中的表达有显著差异(P＜0.01)。Western-blot法显示相同的结果。　　 (2)HMGA2在肺腺癌组织中的表达阳性率明显高于ERCC1,两者的表达呈负相关(r=-11.347,P＜0.001)。　　 (3)HMGA2mRNA在肿腺癌组织中表达含量高,在正常肺组织中表达表达含量低,两者的表达含量有统计学差异(P＜0.01)。在肺腺癌组织中,低分化腺癌中表达含量高于高分化肺腺癌组织,两者表达有显著差异(P＜0.01)。在非淋巴结转移癌中呈现低表达含量,在淋巴结转移癌中呈现高表达含量,两者HMGA2mRNA表达量有显著差异(P＜0.01)。在无淋巴结转移肿腺癌组织中的表达量明显低于有淋巴结转移肺腺癌组织,有显著统计学差异(P＜0.01)。　　 (4)采用RT-PCR法及测序法检测在无淋巴结转移肺腺癌组织和有淋巴结转移肺腺癌组织之间HMGA2基因编码区无基因序列的差异。　　 2、抗特异性HMGA2抗体对肺腺癌系A549增殖影响的相关研究　　 (1)MTT结果提示,随着抗特异性HMGA2抗体剂量增加和作用时间延长,A549细胞的增殖呈现抑制,并表现出剂量依赖性和时间依赖性。　　 (2)Realtime-PCR和Western-blot结果证实抗特异性HMGA2抗体干扰后,A549细胞株中HMGA2蛋白和mRNA呈现低表达。　　 3、抗特异性HMGA2抗体对化疗敏感性的影响　　 抗HMGA2特异性抗体作用于A549细胞株,MTT结果提示三种常用化疗药物对A549细胞的增殖抑制作用明显增强,呈现出剂量依赖性和时间依赖性。说明抗HMGA2特异性抗体干扰后,三种化疗药物对A549细胞的敏感性提高。提示抗HMGA2特异性抗体与化疗药物联合治疗肿腺癌呈现有效性并表现出协同作用。　　 结论：　　 1、HMGA2在有淋巴结转移的肿腺癌组织和淋巴结转移癌组织中高表达,提示HMGA2与肺腺癌的恶性程度和淋巴结转移有相关性,也进一步说明它可能是肺腺癌淋巴结转移的一个提示因子。并可能是肺腺癌淋巴结转移的一个治疗靶点。　　 2、HMGA2在肺腺癌组织中高表达和ERCC1低表达,两者呈现负相关,具体机制还需要进一步的研究。　　 3、A549细胞中HMGA2表达的下调可以通过抗HMGA2特异性抗体的作用而实现。MTT实验结果表明,抗HMGA2特异性抗体可以下调A549细胞中HMGA2的表达从而表现抑制肺腺癌转移的作用。　　 4、抗HMGA2特异性抗体通过下调HMGA2,提高常用化疗药物对肺腺癌A549细胞系的敏感性,因此有协同作用,可以成为肿腺癌药物治疗中的一个靶点和新的治疗途径。